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第一部分 地中海拟无枝菌酸菌(Amycolatopsis mediterranei)U32染色体遗传和物理特征的脉冲场电泳技术分析:地中海拟无枝菌酸菌U32(Amycolatopsis mediterranei U32)是力复霉素SV的工业生产高产菌株.采用原位包埋消化,以及PshB I、Dra I等内切酶进行原位酶切片脉冲场电泳分析发现,地中海拟无枝菌酸菌U32仅有一条约10 Mb的线性染色体,没有内源性质粒.选择编码与力复霉素生物合成有关的初级、次级代谢关键酶的基因以及编码次级代谢调控蛋白的基因,对PshB I酶切谱进行了Southern杂交定位.在定位的十余个基因中绝大多数只出现单一杂交信号,只有核糖体RNA转录单位出现5个杂交信号,说明U32至少有5套核糖体RNA转录单元,地中海拟无枝菌酸菌的这一特点与链老菌(6套rrn)非常相似.U32染色体上没有I-Ceu I酶切位点,这与分枝杆菌情况类似.第二部分 头状链轮丝菌(Streptoverticillum caespitosus)ATCC27422染色体复制起始区的克隆、序列分析与功能研究:头状链轮丝菌(Streptoverticillum caespitosus)ATCC27422是抗肿瘤药物丝裂霉素A的主要产生菌之一.采用PCR的方法从该菌中克隆了一段1.3kb的片段,通过核酸数据库搜索发现该片段与来自天蓝色链霉素(Streptomyces coelicolor)的的oriC以及两侧的序列(AF187159)有超过80﹪的同源性,因此初步认定克隆片段为头状链轮丝菌的oriC.进一步分析发现该片段含有22个DnaA-box,保守序列为TTGTCCACA.首次发现了重叠DnaA-box结构,即两个DnaA-box方向相反、彼此相互有8个碱基重叠在一起.进一步分析证实,这种现象在链霉菌和分枝杆菌中普遍存在,在分枝杆菌中一般由第一、二DnaA-box组成,在链霉菌和链轮丝菌中由最后两个DnaA-box构成.复制活性分析结果表明,229bp序列是oriC活性所必需的,缺失后导致复制活性完全丧失;而127bp序列的缺失只造成转化效率下降40﹪;同时,当oriC两端带有部分dnaA(3端)、dnaN(5端)基因片段时,转化效率下降8倍,但菌落和菌丝形态较健康,推测可能是由于质粒对细胞分裂等的干扰作用减小,这意味着oriC两端的dnaA、dnaN苈作了分别编码各自基因外,对以oriC构建的质粒的复制或染色体的复制有影响.分析推测,可能与质粒的稳定性或包含有复制起始调控的靶序列等有关.