【摘 要】
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禽流感(Avianinfluenza，AI)是由A型流感病毒（AIV)引起禽类的一种疾病综合症，鸡、火鸡以及鸭等禽类均可感染，引起禽类死亡、产蛋量下降、严重的呼吸道病、系统综合症或隐性感染等
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禽流感(Avianinfluenza，AI)是由A型流感病毒（AIV)引起禽类的一种疾病综合症，鸡、火鸡以及鸭等禽类均可感染，引起禽类死亡、产蛋量下降、严重的呼吸道病、系统综合症或隐性感染等多种病型。流感病毒通过其表面的血凝素(HA)与宿主细胞表面唾液酸寡糖受体结合侵染宿主细胞。AIV倾向识别α-2，3连接型受体(NeuAcα-2，3-Gal)，而人流感病毒倾向识别α-2，6连接型受体(NeuAcα-2，6-Gal)。
本研究克隆鸡β-半乳糖苷α-2，3-唾液酸转移酶Ⅰ(ST3GalⅠ)基因并将其插入真核表达载体pcDNA3.1-EGFP中构建真核表达质粒，转染BHK-21细胞后，通过G418抗性和绿色荧光蛋白标记双重筛选，鉴定一株表达ST3GalⅠ阳性的单克隆细胞株，绿色荧光丰富。经流式细胞仪检测，BHK-21-ST3GalⅠ细胞株中α-2，3连接型受体丰度较亲代BHK-21细胞显著提高。连续传5代10代后仍能检测到其表达，表明ST3GalⅠ基因在细胞中稳定表达。为了检测BHK-21-ST3GalⅠ细胞对H9亚型流感病毒和H5N1Re-5病毒的增殖效果，将H9亚型流感病毒和H5N1Re-5病毒接种BHK-21-ST3GalⅠ细胞和BHK-21细胞，同时设普通胰酶和TPCK-胰酶对照组。接毒72小时后收获细胞液，常规方法测定血凝素(HA)滴度。实验结果表明，BHK-21-ST3GalⅠ细胞中AIV的HA滴度达到1∶256，显著高于BHK-21细胞组，表明其更适于流感病毒的增殖，具备生产流感病毒疫苗的潜力。筛选稳定表达鸡ST3GalⅠ基因的BHK-21细胞株，为进一步研究AIV受体结合特性以及大规模细胞培养生产疫苗奠定基础。
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