利用表达谱芯片技术筛选家兔肌肉发育相关基因

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兔肉是一种高蛋白、高卵磷脂、高氨基酸和低胆固醇的肉类,是肥胖、肝病、心脑血管病、糖尿病患者的理想肉食。虽然兔肉是一类优质的肉类食品,但由于人们饮食习惯和家兔饲养管理因素的制约,推广和普及程度还较低。此外,目前国内对家兔肉质性状的研究远不及猪肉、禽肉等,这也是制约肉兔产业发展的一个重要因素。本研究选择新西兰白兔和福建黄兔作为研究对象,旨在探寻影响家兔肌肉发育的相关功能基因,为家兔肉质性状的改良提供一定的理论基础,也为肉用家兔的育种工作提供一定的借鉴。本研究利用表达谱芯片、荧光定量PCR、PCR-SSCP等技术分析引进品种新西兰白兔和我国地方品种福建黄兔这两个肉兔品种的遗传差异,主要结果如下:1.利用表达谱芯片技术筛选出了新西兰白兔和福建黄兔不同部位肌肉中的差异表达基因,包括Myh6、Myh7、Myh7b、Myo5b、Tnnc1、Tpm3、Acta2等,以上基因的表达差异水平都在3倍以上,并且与肌肉的发育联系十分紧密。2.荧光定量PCR结果显示家兔不同部位肌肉中Tpm3和Myh7基因的表达规律比较相似,两个基因在背肌中的表达水平总体上高于腿肌。从两个基因较为相似的时空表达规律来看,它们可能具有协同作用。3.本研究挑选Myh7基因第5外显子设计引物,该外显子总长度为109bp,所扩增的片段包括该外显子全长及部分前后的内含子,总长度145bp。在新西兰白兔群体中发现47个AA型个体,5个AB型个体;在福建黄兔群体中发现52个AA型个体,14个AB型个体,两个群体中均未发现BB型个体。新西兰白兔群体中A(未突变)基因频率为0.952,B(突变)基因频率为0.048;福建黄兔群体中A(未突变)基因频率为0.894,B(突变)基因频率为0.106。对PCR产物进行测序比对发现,在2375处发生单碱基突变位点,原序列上该位点为胞嘧啶(C),在少数个体中发现了胸腺嘧啶(T)。经序列分析和密码子比对,此突变并未引起氨基酸的改变,为同义突变。Myh7蛋白二级结构含有1935个氨基酸,其中α螺旋(h)74.94%,无规卷曲(c)19.17%,延伸链(e)5.89%。Myh7蛋白含有两条螺旋链,没有复杂交织,结构较为简单,其链状的特点可能与肌原纤维的结构形成有关。
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