【摘 要】
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外源抗虫基因的高水平表达是转基因植侏具备高效抗虫能力的最主要条件.该论文对Bt毒蛋白基因进行了修饰,使其转译产物最终定位到寄主植物细菌内质网中,以提高Bt毒蛋白的积累
【出 处】
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中国科学院遗传学研究所 中国科学院遗传与发育生物学研究所
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外源抗虫基因的高水平表达是转基因植侏具备高效抗虫能力的最主要条件.该论文对Bt毒蛋白基因进行了修饰,使其转译产物最终定位到寄主植物细菌内质网中,以提高Bt毒蛋白的积累量,并达到高效抗虫的目的.首先利用TP-PCR技术对CrylIA(c)基因进行了改造,使其编码产物具SKTI信号肽-CrylIA(c)-KDEL(SBK)的结构.DNA测序表明,研究人员所获得的基因序列以及推论的氨基酸序列与预期结果完全一致.通过体外DNA重组,获得了含有CaMV35S启动子-SBK-Nos终止子表达盒的中间质粒.将此表达盒插入mini-Ti质粒pBin19中,由此得到了植物表达载体pBinΩSBK,并以含有未经修饰的CrylIA(c)基因的植物表达载pBinΩBC作为对照,通过根农杆菌介导法分别转化了烟草.ELISA检测表明:在转基因烟草中,修饰CrylIA(c)基因的表达量显著高于未修饰的CrylIA(c)基因的表达量,其转译产物占可溶性总蛋白的百分含量平均是未修饰CrylIA(c)基因的2.4倍,最高可达0.28%.利用修饰后的CrylIA(c)基因构建了Bt毒蛋白和豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)的融合蛋白基因,使其转译产物具有SKTI信号肽-CrylIA(c)K-CpTI-KDEL的结构,这一结构亦可使其滞留在内质网中.ΩΩΩ该论文还构建了修饰后GlryIA(c)基因和Bt-CpTI融合蛋白基因的大肠杆菌表达质粒pMFSBK和pMFSBCKM.其细菌表达工作正在进行之中.
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