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第一部分：肝癌细胞以及组织中反义RNA调控乙酰胆碱酯酶表达的研究 乙酰胆碱酯酶的主要功能是水解乙酰胆碱以终止胆碱能神经信号的传递，研究发现acetylcholinesterase(AChE)也参与细胞凋亡过程的调控。越来越多的报道表明AChE在多种肿瘤中的表达异常，并且可以作为肿瘤生长因子发挥作用，但是其在肿瘤中的调控作用还有待进一步阐述。近年来的研究表明反义RNA作为调控RNA能够调控基因的表达。在本研究中，首先我们通过系统检索UCSCGenome Brower并通过引物特异性RT-PCR在多种人正常肝以及肝癌细胞系中验证了自然存在的AChE的反义RNA(AChE-AS)。我们还通过蛋白免疫印迹和实时定量PCR实验发现AChE-AS和AChE的表达在多种细胞系以及临床肿瘤组织中都具有负相关性。接着通过干扰小RNA(siRNA)沉默实验发现AChE-AS能够调控突触型AChE(Synatic-AChE，S-AChE)的表达。而实时定量PCR实验发现AChE-AS主要定位于细胞核内并且近染色质。我们通过蛋白免疫印迹实验进一步发现AChE-AS能够通过影响AChE的启动子的功能来抑制AChE的表达。而ChIP和qRT-PCR等实验证明AChE-AS是影响AChE启动子区组蛋白的甲基化水平，而不是影响AChE启动子区的DNA甲基化水平。最后通过Western Blotting和TUNELassay实验我们发现沉默AChE-AS能够增加细胞对化疗药物顺铂和丝裂霉素C的敏感性。通过本研究，我们鉴定了能够通过影响AChE启动子区表观遗传修饰来调控AChE表达的AChE反义RNA。 第二部分：肝癌细胞以及组织中DNA甲基化调控AChE表达的研究 细胞凋亡也称细胞程序性死亡，是细胞主动性的清除无用的、受损的以及有害的细胞的过程。近年来的研究显示，在由各种凋亡诱导剂诱导的不同细胞系的凋亡过程中，AChE的表达上调。进一步的研究发现过表达AChE并不能启动凋亡而能增强细胞的凋亡敏感性。有研究发现，AChE的表达受microRNA、JNK、GSK3β等调控，但是AChE在凋亡过程中的上调表达的具体机制还有待进一步研究。在本研究中，我们发现DNA甲基化转移酶Ⅰ(DNA methyltransferase，DNMT1)的抑制剂AZA处理细胞后，AChE的表达升高。接下来我们用siRNA沉默DNMT1的表达，结果显示AChE的表达升高，这说明AChE的表达受DNMT1介导的DNA甲基化修饰的调控。进一步的研究发现，在由化疗药物丝裂霉素C(Mitomycin，MMC)、顺铂(Cisplatin，CDDP)、毒胡萝卜素(Thapsigargin，TG)和双氧水(H2O2)诱导的细胞凋亡过程中，DNMT1的表达下调，并且AChE的启动子区的甲基化水平降低，同时AChE的表达升高，这些结果说明凋亡过程中AChE的表达受到DNA甲基化修饰的调控。最后我们的研究发现磷酸化的p38的抑制剂SB203580能够回复凋亡过程中DNMT1的下调，这些结果表明磷酸化的p38影响了凋亡过程中DNMT1对DNA甲基化的调控。在本研究中，我们初步证明了在细胞凋亡过程中，AChE的表达受DNA甲基化修饰的影响，并且MAPKs也参与到DNMT1对AChE的调控。