论文部分内容阅读
目的:建立神经病理性疼痛及假手术对照组大鼠腰段脊髓组织双向凝胶电泳图谱，比较分析神经病理性疼痛大鼠腰段脊髓组织中蛋白质组的变化和差异表达，鉴定出差异表达的蛋白质点。 方法:成年雄性SD大鼠，体重260～320g，建立坐骨神经结扎(CCI)致神经病理性疼痛模型，随机分为2组:假手术组（Sham组，n=6），CCI致神经病理性疼痛组（CCI组，n=6）;Sham组仅暴露右侧坐骨神经分支，不结扎。所有大鼠均测基础痛阈值，并在第3天、5天、7天时测定大鼠右后爪机械痛阈值(PMWT)。7天后处死大鼠，取腰段脊髓组织蛋白以固相pH梯度等电聚焦(IEF)为第一向，SDS-PAGE垂直电泳为第二向进行双向凝胶电泳(2-DE)，应用PDQuest分析软件对考马斯亮蓝染色的2-DE图谱进行图像分析，对差异蛋白质点进行MALDI-TOF MS质谱鉴定分析，并利用Mascot查询软件搜索Swiss-Prot数据库进行生物信息学分析。 结果:假手术对照组大鼠和慢性坐骨神经缩窄性损伤致神经病理性疼痛大鼠腰段脊髓组织双向电泳图谱中各分离出清晰的约1000个蛋白质点，2-DE图谱中分离出明显差异表达的蛋白有38个，其中33个蛋白表达显著上调，5个蛋白表达显著下调。选取了21个丰度较高、分辨清楚的差异蛋白质点进行MALDI-TOF MS质谱鉴定分析，共获得21个肽质量指纹图谱。利用Mascot查询软件搜索Swiss-Prot数据库，共搜索到16个蛋白质。生物信息学分析初步鉴定的蛋白质为:热休克蛋白、分子伴侣蛋白(heat shock protein70，HSP70热休克蛋白70)，抗氧化蛋白（Peroxiredoxin-1蛋白），神经元和神经胶质细胞特异蛋白（Glial fibrillary acidic protein，GFAP胶质原纤维酸性蛋白;Neurofilament medium polypeptide，NEFM牛神经纤维介质多肽），信号转导蛋白(Guanine nucleotide-binding protein，G-蛋白鸟苷酸结合蛋白;Annexin A3，膜联蛋白A3)，突触相关蛋白(Synaptosomal-associated protein，SNAP)，细胞内环境稳态相关蛋白(Serum albumin，血清白蛋白)，能量代谢酶类相关蛋白（Aconitate hydratase，乌头酸水合酶;Malate dehydrogenase，苹果酸脱氢酶;6-phosphogluconolactonase，6-磷酸葡萄糖脱氢酶;Carbonyl reductase，碳酰还原酶），细胞骨架蛋白（Spectrin alpha chain，膜收缩蛋白α链;Actin，cytoplasmic1，肌动蛋白），血红蛋白。 结论:初步建立了较理想的CCI致神经病理性疼痛大鼠脊髓组织蛋白质组双向电泳图谱，并发现了38个差异表达的蛋白质点，质谱鉴定分析了16个相关差异蛋白，为进一步研究神经病理性疼痛机制及发现新的相关分子靶点打下了基础。