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HBV感染是一个全球性的健康卫生问题，每年有大约100万人死于HBV感染所致的肝功能衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌。乙肝病毒的复制是一个极其复杂的过程，需要很多宿主蛋白的参与共同完成，目前已经报道很多热休克蛋白在HBV病毒的复制，转录，蛋白折叠，核衣壳组装及病毒分泌中起着重要的作用。我们实验室的前期研究发现，在HBV感染的患者肝脏中热休克蛋白gp96的表达水平是增高的，且这种上调表达与HBV的复制程度及由HBV引起的疾病的进程呈正相关，但是gp96上调表达的机制以及gp96在HBV复制中的作用还不清楚，需要进一步的研究。 本文首先通过real-timePCR和Westernblot检测瞬时转染HBV复制型质粒后gp96的mRNA和蛋白水平变化，我们发现HBV的表达可以明显诱导gp96的转录和表达，进一步通过双荧光素酶活性检测和real-timePCR检测HBV编码的7个功能蛋白对gp96的promoter和mRNA的影响，结果显示病毒的HBx可以显著地增强gp96的启动子活性和转录表达。更进一步机制研究发现NF-κB活性在HBx诱导gp96的表达中发挥重要的作用。定点突变实验结果显示，把gp96promoter上的NF-κB位点突变后，HBx不再对其有诱导作用;加入NF-κB抑制剂PDTC后，HBx不再诱导gp96的表达。进一步EMSA和CHIP实验结果显示HBx促进了转录因子NF-κB和gp96promoter的结合。最后通过RNA干扰ERK1/2的表达证明ERK/NF-κB信号通路在HBx调控gp96表达中发挥重要作用。 接下来我们研究了gp96对HBV复制的影响。细胞内瞬时转染gp96的真核表达载体后，细胞内和培养上清中HBVDNA水平有明显地提高，培养上清中HBsAg、HBeAg的表达也明显增多。反之，当用RNA干扰技术抑制内源gp96的表达后，HBV的相应指标明显降低。进一步在小鼠高压尾静脉模型中腺病毒介导的gp96的过表达表现出与体外同样的促进HBV复制的效果。另外我们对gp96调控HBV复制的机制进行了初步研究，双荧光素酶活性检测系统及Northern杂交检测结果显示gp96可以明显地激活HBV的转录。通过运用GST-pulldown和免疫共沉淀等蛋白相互作用技术，我们发现gp96可以特异性和HBV聚合酶相互作用。最后我们对一种gp96特异性的小肽构象抑制剂TAT-p37的抗病毒活性进行了研究。结果显示TAT-p37能够明显降低HepG2.2.15细胞上清中HBsAg、HBVDNA水平以及细胞内的HBVmRNA的水平。且TAT-p37可以抑制临床上常见的拉米夫定耐药株的复制和表达。 综上所述，我们首次发现HBV和宿主蛋白gp96之间存在着一种正反馈调节通路，HBx通过激活NF-κB而诱导gp96的转录表达，反过来gp96的过表达又可能通过间接促进HBV转录和直接与HBV聚合酶相互作用而促进HBV的复制和表达。这条通路可能是HBV持续性感染的一个重要原因。并且我们初步证明gp96特异性的小肽抑制剂TAT-p37在没有细胞毒性的剂量范围内有明显的抗病毒活性。这些发现对于临床上检测乙肝复制的动态过程以及乙肝的治疗具有重要的指导意义。