【摘 要】
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梅花转基因育种工作进展缓慢,其主要原因是至今仍未有一个有效的遗传转化体系,而遗传转化体系的前提则是再生体系的建立。本研究旨在通过不同的激素处理以及环境条件的调控,
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梅花转基因育种工作进展缓慢,其主要原因是至今仍未有一个有效的遗传转化体系,而遗传转化体系的前提则是再生体系的建立。本研究旨在通过不同的激素处理以及环境条件的调控,从而建立部分梅花品种的再生体系。整个试验过程中涉及梅花的离体培养体系以及部分梅花品种的成熟叶片培养两部分内容。本研究共选取8个梅花品种为试材,重点以‘铁骨红’(真梅系)、‘美人’梅(樱李梅系)、‘燕杏’(杏梅系)为试验材料,建立了这三个梅花品种的外植体生长、扩繁、生根的基本培养程序。由于梅花中的真梅系组织培养比较困难,因此试验又以‘铁骨红’的组织培养为重点。试验证明,适合‘铁骨红’生长的最佳培养基是改良Q&L培养基,即Q&L大量元素+P培养基微量+MS有机+2倍MS铁盐+AgNO3 4 mg/L+葡萄糖30g/L,该培养基解决了梅花组织培养过程中黄化、顶端死亡等比较难的问题。‘铁骨红’最佳的增殖培养基是改良Q&L+6-BA1.0+NAA0.05+GA30.5(mg/L),其中AgNO3的使用应该注意使用时间,长时间使用会导致试管苗生长畸形。‘铁骨红’最佳的生根培养基是1/2改良Q&L+NAA0.3+IBA0.1(mg/L)。‘美人’梅和‘燕杏’的增殖培养基分别是:WPM+6-BA1.0+NAA0.1 (mg/L)和MS+6-BA0.5+IBA0.05(mg/L)。生根培养基是1/2WPM+NAA0.5 (mg/L)和1/2MS+IBA0.5 (mg/L)。由于三个品种中‘铁骨红’和‘燕杏’的叶片离体再生比较困难,没有获得再生苗。因此第二阶段的叶片诱导愈伤组织再分化成苗选用‘美人’梅为试验材料,结果证明:叶片离体再生必须得分为两个部分,第一部分是愈伤组织的诱导,诱导过程中生长素2,4-D起了决定性的作用,并且以液体培养基为好,具体培养基为1/2WPM+2,4-D 5mg/L。暗培养的愈伤组织再分化率明显高于光培养。在经过7d液体培养基的诱导之后将离体叶片转入1/2WPM+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1mg/L+AgNO38 mg/L+水解乳蛋白100 mg/L培养,再分化率可以达到24.25%。
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