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目的:湿热证是重度脓毒症的重要中医证型之一,发病率高,预后不佳。其证型实质未完全清楚,目前尚缺乏与急性热性病湿热证临床表现更相符合的动物模型。本实验通过制作大鼠急性重症胰腺炎模型及兔急性胆囊炎模型,来探索急性热性病湿热证动物模型的建立,并用该动物模型探讨湿热证的发病机制,为临床治疗提供可靠的实验室依据。同时观察中药大黄素对急性重症胰腺炎大鼠干预的作用。
方法:分别采用5％的牛磺胆酸钠逆行胆胰管注入制作大鼠急性重症胰腺炎模型,及大肠杆菌0111B4注射胆囊同时胆总管部分梗阻制作兔急性胆囊炎模型,观察造模后动物体重、体温、精神、大便、舌苔等,以舌苔厚腻作为评价动物模型湿证存在的指标。大鼠随机分为模型组、假手术对照组、正常组。造模成功后模型组再根据舌苔是否厚腻分为A组(舌苔厚腻组),B组(舌苔正常组),留取动物血清、舌组织,采用ELISA、HE染色、透射电镜、Western-blot、实时定量PCR等方法进行内毒素、TNFα(肿瘤坏死因子α)测定；组织形态学分析及组织湿重/干重(W/D)比值、伊文思蓝含量的测定；Na+-k+-ATP酶及SOD、MDA测定；AQP3、Z0-1、Caveol in-1蛋白质及mRNA表达,以探讨湿热证的发病机制。并用大黄素对模型大鼠进行干预,通过观察血淀粉酶、胰腺病理及如上指标,观察大黄素对急性重症胰腺炎的作用及对湿热证的影响及作用机制。结果:1.动物模型制作:急性重症胰腺炎大鼠造模后出现倦怠、体重下降(P<0.05)、便溏、舌苔厚腻(出现频率42.6％)、血内毒素及TNFα水平升高(与假手术组及正常组比较P<0.05),体温升高不明显；兔急性胆囊炎模型仅出现倦怠、发热,而没有舌苔厚腻、便溏等证象出现。2.病机探讨:急性重症胰腺炎湿热证大鼠模型:血清SOD水平下降,MDA水平升高(与对照组比较P<0.05)；舌组织伊文思蓝含量水平增高显著(与对照组比较,P<0.05)；Na+-k+-ATP酶下降显著(与对照组比较P<0.05)；舌组织固有层乳头密度增高,基底层核分裂频数大(与对照组比较P<0.05)；电镜示湿热证大鼠血管内皮细胞间紧密连接明显增宽,裂隙形成,吞饮小泡增多,线粒体结构破坏；带状闭合蛋白(ZO-1)蛋白表达及mRNA显著降低(较模型B组及对照组比较P<0.05)；小泡蛋白(Caveolin-1)表达升高显著(较模型B组及对照组比较P<0.05):AQP3mRNA升高(较模型B组及对照组P<0.05)；Caveolin-1mRNA表达有升高趋势。3.大黄素干预治疗:明显降低SAP大鼠死亡率,减轻胰腺组织病理破坏；减少大鼠厚腻苔的出现；提高血清SOD活力、降低MDA水平；提高Na+-k+-ATP酶的活力；舌组织W/D比值,伊文氏蓝含量均下降；明显减少AQP3、Car-1蛋白及mRNA表达,对Z0-1的蛋白及基因表达作用相对较弱。
结论:1.急性重症胰腺炎大鼠可以作为急性热性病湿热证的动物模型,而急性胆囊炎兔模型更倾向于温热类动物模型表现,不宜作为急性热性病湿热证的动物模型。2.湿热证病机复杂,涉及氧自由基损伤,能量代谢异常,Na+-k+-ATP酶活性下降等,血管通透性增高是重要因素之一,不仅涉及到水分子等小分子通透的增高,也包括大分子等物质跨膜转运的增多。3.大黄素干预治疗改善SAP大鼠预后,对SAP大鼠治疗疗效确切,并减少湿热证的发生。