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1.青少年成骨细胞的体外分离、培养、扩增及表型鉴定
目的:建立青少年成骨细胞(osteoblast，OB)体外分离、培养、扩增及表型鉴定的方法，为后续分子生物学检测做准备。
方法:所有研究对象分为2组：NF1伴脊柱侧凸(NFS)组和正常对照组。其中NF1组包括患者10例，其中女4例，男6例，年龄11～18岁(平均14.7岁)，术前Cobb角52°～94°(平均60.3°)。正常对照组9例，为非脊柱侧凸患者，女3例，男6例，年龄12～18岁(平均年龄15.3岁)。所有受试者均需取右侧髂松质骨行植骨融合，在病人知情同意和不影响手术疗效的情况下取少许松质骨标本。胰蛋白酶预消化后植块法分离培养OB，原代培养并传至P2代行细胞记数，同时记录细胞样本各代的增值时间。取P2代细胞通过碱性磷酸酶染色、钙节结染色及RT-PCR检测骨钙素表达行OB的表型鉴定。
结果:两组胰蛋白酶预消化后植块法分离所得的原代OB均呈贴壁生长。体外培养第5～6天可见少量贴壁细胞，培养第4周见植块周围细胞密集，已呈重叠生长，植块间细胞也接近融合，细胞形态趋向较均匀的短梭形。P2代细胞总数平均可达0.5×107个。两组细胞各代平均增值时间无统计学差异(P>0.05)，从P0～P2代平均约需45天。P2代细胞经碱性磷酸酶染色、钙节结染色及RT-PCR检测骨钙素表达鉴定证实获得和培养的细胞为典型的OB。
结论: NF1伴脊柱侧凸患者与正常对照组在体外分离、培养、扩增OB时所表现的生长及增殖特性一致。
2.大角度青少年Ⅰ型神经纤维瘤病伴脊柱侧凸患者的骨密度分析
目的：探讨骨质疏松与大角度青少年Ⅰ型神经纤维瘤病(neurofibromatosis1，NF1)伴脊柱侧凸患者的关系。
方法：NFl伴脊柱侧凸组共有患者18例，年龄10岁～18岁(平均14.9岁)，侧凸Cobb角40°～132°(平均81.4°)；同年龄非脊柱畸形患者(对照组)25例，年龄11岁～19岁(平均15.6岁)，所有研究对象均行双能X线吸收仪测量非优势侧的股骨近端和腰椎(L2-4)的骨密度(bone mineral density，BMD)，将两组受试者的测量结果进行t检验比较，并对NF1伴脊柱侧凸组BMD结果与侧凸Cobb角进行相关性分析。
结果：两组受试者在年龄、性别比例无明显差异(P>0.05)，青少年Ⅰ型神经纤维瘤病伴脊柱侧凸患者所测各部位的骨密度均明显低于正常对照组(P<0.01)，腰椎(L2-4)平均骨密度(0.61g/cm2)明显低于对照组(1.03 g/cm2)，腰椎骨密度的降低比股骨明显，NF1伴脊柱侧凸组患者腰椎及非优势侧股骨近端BMD与侧凸Cobb角无显著性相关(P>0.05)。
结论：青少年NF1伴脊柱侧凸患者存在全身性的骨量减低，其与侧凸的严重程度无关，可能与NF1伴脊柱侧凸的发病机理有关。
3.BMP-2在Ⅱ型神经纤维瘤病伴脊柱侧凸患者成骨细胞中的表达及意义
目的:从成骨细胞(osteoblast，OB)水平探讨骨形态发生蛋白-2(bone morphogeneticprotein-2，BMP-2)与Ⅰ型神经纤维瘤病(neurofibromatosisl，NF1)伴脊柱侧凸患者低骨量的关系。
方法: NF1伴脊柱侧凸患者10例，年龄11～18岁(平均14.7岁)，Cobb角52°～94°(平均60.3°)；同年龄非脊柱畸形患者(对照组)9例，年龄12～18岁(平均15.3岁)。两组患者术前均采用双能X线吸收测量仪(dual-energy x-rayabsorptiometry，DEXA)测量骨密度(bone mineral density，BMD)，测量部位包括非优势侧股骨近端及腰椎。所有受试者术中取适量髂后上棘)的松质骨，运用植块法培养成骨细胞。培养至P2代后行表型鉴定，用RT-PCR和Western blotting法检测NF1组和非侧凸对照组中BMP-2核酸及蛋白的表达水平。
结果: NF1组腰椎(L2～L4)及股骨近端的BMD值明显低于对照组，但两组病例OB水平BMP-2的核酸及蛋白的表达量均无显著统计学差异(P>0.05)。
结论: BMP-2在OB水平核酸及蛋白表达强度的异常可能与NF1伴脊柱侧凸骨量降低缺乏显著相关性。