【摘 要】
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双徼体(double minute chromosomes,DMs)是细胞中成对、可自主复制的额外染色体成分,经常含有扩增的基因,参与细胞增殖,或为细胞生长提供选择优势。由于DMs没有中心粒和端粒,
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双徼体(double minute chromosomes,DMs)是细胞中成对、可自主复制的额外染色体成分,经常含有扩增的基因,参与细胞增殖,或为细胞生长提供选择优势。由于DMs没有中心粒和端粒,其复制、分离的详细机制目前还不十分明了。而且双微体形成早期的模型很难得到,目前对其产生的机制仍有相当大的推测成分。人卵巢癌细胞系UACC-1598自发地存在大量DMs,是探讨DMs染色体起源及稳定存在等机制的良好实验材料。本实验利用构建好的绿色荧光蛋白(GFP)标记核小体成分组蛋白H2B真核表达载体(H2B-GFP)转染UACC-1598细胞,以及对利用双胸苷同步化法同步于G1/S期交界的UACC-1598细胞进行活细胞染色,通过活细胞工作站(living cell station)的配套软件获取和分析检测荧光物质的特征,可以反映活体细胞状态下染色体的情况,观察人卵巢癌细胞UACC-1598中DMs的结构特点,观察到了较高放大倍数下的细胞分裂过程的连续实时影像,说明活细胞工作站可以用来研究细胞结构的动态改变过程。另外本实验用浓度逐步增加的氨甲喋呤(MTX)诱导正常小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3耐药,耐MTX50 μmol/L时产生光镜可见的DMs,3T3R500细胞经浓度逐步增加的MTX药物筛选可获得稳定耐受300 μmol/L MTX的细胞群体(3T3RS00MTX300),将两种细胞进行比较发现,耐药细胞对培养条件要求较高；前者DMs的数量较少,而且并不是所有分裂相中都含有DMs;不同耐药量细胞中DMs的数量不同,DMs的数目随着耐药量的增加而增加。
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