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目的：人硫氧还蛋白(human Thioredoxin，hTRX)是含104个氨基酸，分子量约12Kda的小分子蛋白，其具有多种重要的生物活性，包括对一些转录因子如NFBk、AP1、糖皮质激素受体的调控，抑制凋亡，促进细胞增殖及清除氧自由基等，是体内主要的抗氧化蛋白酶系统之一，对多种致氧化应激因素引起的细胞或器官损伤有保护作用。因此我们通过测定携带克隆人硫氧还蛋白(hTRX)基因的pGEM()-T Easy/TRX重组质粒序列，并构建含有该目的基因的重组腺病毒载体，为进步实验证实hTRX对病毒性心肌炎是否具有保护作用及其他各种作用奠定了基础。
方法：测定pGEM()-T Easy/TRX重组质粒的序列，将pGEM()-T Easy/TRX(含NotI和SalI酶切位点)和穿梭质粒pshuttle2分别用NotI和SalI37℃双酶切后，回收目的片段，在4℃下用T4DNA连接酶连接过夜。连接产物转化大肠杆菌JM109，筛选阳性克隆后提取质粒，进行PCR、双酶切电泳鉴定。重组质粒pshuttle2-TRX用CeuI和PeuI37℃双酶切后，回收带有CMV启动子的TRX基因小片段，用T4DNA连接酶在4℃下连接E1、E3缺失的含有同样酶切位点的Adeno-X病毒DNA过夜，连接产物转化大肠杆菌JM109，筛选阳性克隆后用PCR、双酶切方法进行鉴定。
结果：(1)对pGEM()-T Easy/TRX重组质粒进行序列测定，测定结果与GeneBank序列J04026基本一致，其中包括TRXcDNA全长。(2)构建出含TRX的穿梭质粒pshuttle2-TRX(3)成功获得Tet-Off诱导的重组腺病毒载体pAdCMV-TRX。
结论：TRX基因的克隆及其重组腺病毒载体pAdCMV-TRX的成功构建，为进一步研究TRX生物活性及发病与氧化损伤关系密切的疾病，如病毒性心肌炎、动脉硬化、心肌病、糖尿病、Alzheimer’s病等提供新的手段。