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目的:本课题研究的目的是通过建立大鼠大脑中动脉缺血后再灌注的模型,用神经功能缺失行为学评分对模型予以评价;然后通过TTC染色测定梗死范围、大鼠脑组织的组织病理学和脑血管造影等更深层次的分析再通时间与血管损伤之间的关系,为探讨血管再灌注最佳时间段提供理论依据。
方法:动物分组:取健康成年SD大鼠50只,体重250～280g,周龄8～10周,随机分为5组:正常对照组10只,实验组40只,按梗塞后不同取栓时间分为6小时、12小时、24小时、72小时共4个亚组。实验组使用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型。各组大鼠术后进行神经功能缺失行为学评分,1～3分者入选实验。于预定时间点拔出大鼠线栓,进行血管造影,然后断头取脑,使用HE染色光镜观察大鼠脑组织病理学改变、TTC染色确定脑梗塞范围。对血管造影进行观察,对一、二、三、四级血管进行计数,观察血管情况。数据应用SPSS15.0软件统计。
结果:大鼠大脑中动脉缺血模型的制作成功,稳定性高。栓塞后的大鼠均表现出不同程度的偏瘫症状。
大鼠脑组织TTC染色显示,正常呈鲜红色,梗死区呈苍白色,随着梗死时间的延长梗死区呈逐渐扩大趋势。
脑组织病理学及电镜下脑细胞超微结构显示,24小时后梗塞中心区域出现大量神经元不可逆性坏死;缺血时间延长,坏死程度加重,坏死范围扩大;缺血半暗区部分神经元可修复性坏死,多数细胞结构受损。
脑血管造影观察:正常组血管走行正常,分支清晰:缺血6小时,梗塞侧部分三、四级血管脑血管闭塞、痉挛、缺失;缺血12小时,大部分三、四级脑血管闭塞、痉挛、缺失;缺血24小时,三、四级脑血管不再显影,部分一、二级分支闭塞、痉挛、缺失;72小时,脑血管造影只剩余主干,即大脑中动脉。统计学分析显示:一、二级脑血管造影计数,在正常组与6小时、12小时实验组之间无明显差异(P＞0.05),24小时、72小时实验组与正常组、6小时、12小时实验组比较显示血管计数明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05);三、四级脑血管造影计数,6小时、12小时实验组与正常组比较显示血管计数明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05)。
结论:
1.线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注模型效果良好。经神经功能行为学评分、脑组织大体标本、TTC染色、HE染色组织及电镜下细胞超微结构观察等证实造模成功。
2.脑梗塞时间在24小时～72小时时,脑血管损伤程度最重,梗塞中心区神经元不可逆性坏死明显,随着时间的延长,坏死程度加重;缺血半暗区部分神经元坏死,多数呈可修复性,仍存在挽救的机会。
3.在缺血梗塞后,各级脑血管分支计数结果显示出随时间变化逐渐减少的特点,二者的表达之间具有明显的相关性。