【摘 要】
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南瓜韧皮部蛋白PP2是一种在植物韧皮部特异性表达的蛋白质,将该基因启动子的839bp片段进行了缺失分析,结果表达在-467bp到-177bp之间可能存在增强启动子活性的区域,并在此基
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南瓜韧皮部蛋白PP2是一种在植物韧皮部特异性表达的蛋白质,将该基因启动子的839bp片段进行了缺失分析,结果表达在-467bp到-177bp之间可能存在增强启动子活性的区域,并在此基础上将-467bp~-177bp区域进行了加倍处理,构建了增强型NPP2启动子,该启动子驱动的GUS活性是原长启动子的6倍,是CoYMV启动子活性的3.2倍,是35S启动子的1.2倍.因此,NPP2启动子是一种有潜在应用价值的韧皮部特异性启动子.为对其表达活性及特异性进行进一步的确证,对其转基因子代烟草进行了一系列分子生物学检测.Southern blot结果表明,该启动子驱动的GUS基因可以遗传给子代,并有1~2个拷贝.GUS组织化学染色表明,该启动子仍然具有组织特异性,在转基因烟草的根、茎、叶、花等组织中都表现出明显的组织特异性.GUS活性检测显示,该启动子的GUS活性是35S启动子的1.4倍,是CoYMV启动子的4倍,表明该启动子是一种强启动子,具有潜在的应用价值.在上述实验的基础上,利用增强型NPP2启动子构建了pBdENP-ACA、pBdENP-GNA、pBdENP-ACA+GNA 3种抗虫植物表达载体,并以农杆菌介导转化获得了转基因烟草.
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