【摘 要】
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该研究从实验室分离获得的一个胡萝卜的cDNA片DcRB7开始,主要完成了以下两方面的工作:1、证明了DcRB7是一个根特异表达的水通道蛋白基因.采用反向PCR的方法得到其上游650bp的
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该研究从实验室分离获得的一个胡萝卜的cDNA片DcRB7开始,主要完成了以下两方面的工作:1、证明了DcRB7是一个根特异表达的水通道蛋白基因.采用反向PCR的方法得到其上游650bp的启动子序列.将这段序列克隆进含有GUS报告基因的载体,通过叶盘法转化烟草得到转基因植株.对转基因植株进行组织化学染色,可以观察到在幼苗时期这段序列能指导报告基因在根中特异表达.同时,采用荧光法测量转基因植株中不同组织的GUS活性,发现这个启动子区段在烟草成体植株的根茎叶中都能驱动GUS基因的表达,虽然报告基因在其根部特异性表达的性状并不明显.2、以DcRB7 cDNA作探针筛选胡萝卜基因组文库,获得了九个阳性克隆.对其中的两个进行亚克隆及序列测定,发现这两个克隆都包含了完整的读码框和上下游序列.两个读码框都编码了250个氨基酸和一个终止密码子.推演的氨基酸序列具有六个跨膜结构、两个膜内区和水通道蛋白的两个标志motif:NPA.迄今为止的文献中未见这两个基因的报导,表明我们获得了胡萝卜水通道蛋白家族的两个新成员DcWCP1和DcWCP2.基因进化树分析表明这两个基因属于水通道蛋白的TIP亚类.
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