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目的:本实验通过单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)建立梗阻性肾病大鼠模型,激活肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS),诱导醛固酮活化,进而导致肾脏炎性损伤及间质纤维化。观察醛固酮效应介质血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶-1(Serum and glucocorticoid-induced protein kinase 1,SGK-1)的表达,检测与其作用途径相关的指标单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)、F4/80(巨噬细胞标志物)、转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)的变化,观察依普利酮能否通过抑制醛固酮的活化来减轻肾脏炎性损伤及间质纤维化,同时从蛋白、分子水平探讨化瘀通络解毒中药肾络通抑制肾间质纤维化的作用机制。方法:选用48只清洁级雌性Wistar大鼠,体重200±20克,自由饮食及饮水,把温度调控在(22±2)℃。将48只实验大鼠随机的分成假手术组(Sham group)、UUO组(UUO group)、依普利酮组(EPL group)和肾络通组(SLT group),每组12只。适应性喂养1周之后,除了假手术组,其余大鼠复制单侧输尿管梗阻性肾病模型,制备模型方法如下:腹腔注射10%水合氯醛,麻醉后切开左侧中腹部皮肤,找到并且游离左输尿管,用丝线分别结扎在左输尿管的上1/3和中1/3处,然后切断左输尿管,最后逐层的缝合皮肤。而假手术组仅是将左输尿管游离,但是不结扎离断。术后开始给药,依普利酮组在饲料中按100 mg/(kg.d)加入依普利酮药物,肾络通组以肾络通煎剂26g/(kg.d)加入水瓶中饮用,假手术组及UUO组给予等容量生理盐水饮用,均是每天1次,连续干预10天。10天后,各组大鼠称重后断头处死,摘取梗阻侧肾脏,除去被膜后称重,计算各组肾重/体重比值,部分肾组织放入4%多聚甲醛中固定、石蜡包埋,切片行常规HE、Masson及免疫组化染色,剩余肾组织置于-70℃保存用于提取蛋白。运用免疫组化及Western Blot方法检测肾组织SGK-1、MCP-1、TGF-β1以及F4/80的表达情况。结果:1各组大鼠一般情况比较在实验过程中,Sham组大鼠一般情况良好,每日进食及饮水量比较稳定,体重逐渐增长,被毛有光泽,行动敏捷,对外界的刺激反应灵敏。造模大鼠在饮食及饮水方面有所减少,活动较之前明显减弱,毛发亦散乱并且无光泽,对外界的刺激反应较之前迟滞。术后10天,UUO组大鼠的的体重增长较少,并且与Sham组相比较有显著性差异(P<0.01);造模大鼠肾重明显增加,并且与Sham组相比较有显著性差异(P<0.01);EPL组及SLT组大鼠的梗阻侧肾脏重量及肾重/体重较UUO组明显下降(P<0.05)。2各组大鼠肾组织病理改变HE染色显示:Sham组肾组织结构正常,肾间质偶尔可见炎症细胞,肾小管形状规则、未见扩张,镜下可见小管的上皮细胞均匀排列;UUO组可见大量的炎症细胞于肾间质浸润,肾小管出现显著的扩张,小管的上皮细胞出现了空泡变性,甚至坏死、脱落;SLT组及EPL组肾小管的扩张程度以及小管的上皮细胞出现坏死、脱落情况与UUO组基本相同,但是肾间质中炎症细胞的浸润程度较UUO组明显减轻。Masson染色显示:Sham组肾小球和肾小管的结构清晰,仅见少量胶原成分表达;UUO组肾脏结构紊乱,大量胶原纤维沉积于肾间质;与Sham组相比,EPL组及SLT组的胶原纤维明显增多,但明显少于UUO组。3免疫组化检测各组大鼠SGK-1、MCP-1、F4/80、TGF-β1的表达SGK-1在Sham组表达较弱;UUO组SGK-1在肾小管的上皮细胞中表达呈强阳性,在间质亦有表达;EPL组及SLT组的表达呈阳性,但是明显弱于UUO组。Sham组MCP-1在肾小管的上皮细胞中有表达,但表达较弱;UUO组MCP-1的表达显著增强;EPL组及SLT组的表达明显弱于UUO组。F4/80在Sham组中偶见表达;UUO组阳性细胞明显增多,主要见于肾间质;EPL组及SLT组与UUO组相比,F4/80阳性细胞数明显减少。Sham组TGF-β1表达较弱;UUO组中TGF-β1表达显著增强,主要见于近曲小管的上皮细胞的胞浆内;EPL组及SLT组TGF-β1呈中度表达,但与UUO组相比明显减轻。4 Western Blot检测各组大鼠SGK-1、MCP-1、TGF-β1表达UUO组的SGK-1、MCP-1、TGF-β1蛋白表达与Sham组相比明显增强,差异有统计学意义(P<0.01);与UUO组相比,EPL组及SLT组的表达明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:1梗阻性肾病可通过诱导醛固酮活化,进而激活其下游效应介质SGK-1的表达,导致肾脏炎症损伤,依普利酮和肾络通可通过下调SGK-1的表达,减少炎性介质MCP-1的分泌,进而抑制肾脏中巨噬细胞的浸润,减轻肾脏损伤。2依普利酮和肾络通能通过减少巨噬细胞的浸润,下调致纤维化因子TGF-β1的表达,抑制ECM沉积,从而对肾间质纤维化的进程起到延缓作用。