论文部分内容阅读
目的：探讨载体表达的siRNA体内抑制卵巢癌耐药细胞裸鼠移植瘤MDR1基因及p—糖蛋白的表达，及逆转耐药卵巢癌组织多药耐药性的可行性。方法：将浓度梯度诱导法建立的人卵巢癌阿霉素(ADM)耐药细胞亚株OVCAR／AR注射入裸鼠皮下，建立卵巢癌耐药细胞裸鼠移植瘤模型。随机分为三组，待肿瘤直径达0.5cm左右，局部瘤体注射法按0.5mg／kg体重分别导入针对MDR1基因的siRNA的质粒表达载体pSN／mdr1a、pSN／mdr1b，次日给予化疗药物泰素20mg／kg尾静脉注射单次用药，转染空质粒(pSN／e)的裸鼠模型组作对照。动态观测移植瘤生长情况及体积变化，计算肿瘤生长率。于化疗后21天结束实验，取部分移植瘤组织作免疫组织化学染色检测P-gp的表达，另将部分移植瘤组织制备成单个瘤细胞悬液，实时定量RT-PCR测定MDR1 mRNA的表达，流式细胞仪检测P-gp蛋白的表达。结果：1皮下接种卵巢癌耐药细胞OVCAR／AR后，30只裸鼠全部成瘤，免疫组织化学染色显示移植瘤细胞膜及胞浆内有P-gp表达，转染pSN／mdr1a组和pSN／mdr1b组显色程度低于转染空质粒(pSN／e)组，差异有显著性(p＜0.01)。2转染pSN／mdr1a组和pSN／mdr1b组卵巢癌耐药细胞裸鼠移植瘤平均生长率分别为164.5±15.8％和159.6±16.8％，明显低于转染空质粒(pSN／e)组206.2±34.7％(p＜0.01)；pSN／mdr1a组和pSN／mdr1b组之间相比，移植瘤生长率差异无显著性(p＞0.05)。3转染pSN／mdr1a组和pSN／mdr1b组卵巢癌耐药细胞裸鼠移植瘤模型MDR1 mRNA的表达水平分别为(3.320±0.659)×10~8和(3.152±0.589)×10~8拷贝／mL，明显低于转染空质粒(pSN／e)组(4.317±0.774)×10~8拷贝／mL(p＜0.05)；pSN／mdr1a组和pSN／mdr1b组之间相比，MDR1 mRNA的表达差异无显著性(p＞0.05)。4转染pSN／mdr1a和pSN／mdr1b的两组卵巢癌耐药细胞裸鼠移植瘤模型P-gp的表达水平分别为49.06±8.66％和43.99±5.18％，明显低于转染空质粒(pSN／e)的裸鼠模型组62.59±4.49％；pSN／mdr1a组和pSN／mdr1b组之间相比，p-gp的表达差异无显著性(p＞0.05)。结论：质粒载体表达的MDR1特异性siRNA在卵巢癌耐药细胞裸鼠移植瘤模型中可激发RNAi介导的MDR1 mRNA的降解，使其所表达的P-gp明显减少，增加其对化疗药物的敏感性，从而抑制移植瘤的生长。