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肥胖是一种慢性炎症性疾病,其发生发展与脂肪细胞的增殖和充脂过程有关.作为一种能量代谢方面的疾病,是由能量过剩导致的.随着生活水平的日益提高,患有肥胖症的人越来越多,其可导致的动脉粥样硬化及2型糖尿病,这两种疾病时刻威胁着人类的生命健康,怎样预防和治疗肥胖成为摆在人类面前的一道难题. 肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor，TNF-α)是一种炎症因子,有研究表明,TNF-α对肥胖的发生有着十分重要的作用,在脂肪细胞中高表达.Chemerin/CMKLR1信号通路是新发现的与脂肪细胞分化有关的通路,chemerin信号通路的激活,可以促进脂肪细胞的分化.体外培养的3T3-L1前脂肪细胞在诱导其分化为脂肪细胞的过程中,添加外源性的TNF-α,检测脂肪细胞中chemerin的含量,发现添加的TNF-α会促使chemerin表达量上升.但是TNF-α缺失后 chemerin的表达会有怎么的变化?在体内研究TNF-α与chemerin/CMKLR1信号通路的相互关系,能更好的说明问题.本实验以Leprdb/db小鼠、Leprdb/db/TNF-α-/-双基因缺失小鼠、TNF-α-/-小鼠及WT小鼠为实验模型,通过Real-time PCR和免疫印迹技术,检测四组小鼠在3周龄和6周龄时腹股沟处脂肪组织中相关因子的表达量,探讨TNF-α与chemerin/CMKLR1信号通路的关系.本实验结果显示如下: 1.体重数据表明,Leprdb/db/TNF-α-/-双基因缺失小鼠在1-6周龄中体重一直最重，Leprdb/db小鼠次之,TNF-α-/-小鼠第三,WT小鼠最轻.这表明,TNF-α缺失后小鼠的体重增加了.说明了TNF-α缺失可能对脂肪细胞分化产生促进的作用. 2.腹股沟处脂肪组织冰冻切片 HE染色结果显示,3周龄时 Leprdb/db/TNF-α-/-双基因缺失小鼠脂肪细胞的体积比 Leprdb/db小鼠的大,6周龄时亦然.随着年龄的增加脂肪细胞体积不断增大,但是TNF-α-/-小鼠及WT小鼠并未显示出此特点,分析由于瘦素受体缺失的小鼠本身就有发胖的机制,直接比较瘦素受体(Obese Gene Receptor，OB-R)缺失小鼠与瘦素受体和TNF-α双基因缺失小鼠的脂肪细胞可以明显的看出体内脂肪细胞充脂的情况. 3.Real-time PCR检测 chemerin/CMKLR1信号通路相关因子的表达情况,结果显示TNF-α缺失后,chemerin、C/EBPβ、adiponectin、PPARγ2及C/EBPα的mRNA表达水平上升; Wnt、β-catenin的mRNA表达水平下降.推测是由于TNF-α缺失抑制了Wnt/β-catenin信号通路中Wnt和β-catenin靶基因的表达,使 Wnt、β-catenin的mRNA表达水平下调;进而解除了Wnt对C/EBPα的抑制作用,使 C/EBPα的mRNA表达水平上调;chemerin上游基因 C/EBPα表达上升,进而激活 chemerin/CMKLR1信号通路,调控 chemerin的mRNA Chemerin CMKLR1 ERK1/2 ERK1/2可以诱导下游生脂基因的表达,脂肪细胞分化. 4.免疫印迹技术检测β-catenin、C/EBPβ、PPARγ2和adiponectin的蛋白结果显示，TNF-α缺失后,β-catenin的表达水平下调,在3周龄时差异较大.6周龄时,Leprdb/db小鼠和Leprdb/db/TNF-α-/-双基因缺失小鼠脂肪组织中β-catenin的表达较3周龄时都有所下降.这说明瘦素受体缺失的小鼠本身存在一种保护机制,可以抑制肥胖继续发展.一方面，C/EBPβ是C/EBPα的上游基因,TNF-α缺失后 C/EBPβ蛋白表达会上调;另一方面,在Wnt/β-catenin信号通路中,Wnt基因抑制 C/EBPβ向 C/EBPα的转化,两方面共同的作用结果是TNF-α缺失导致 C/EBPα的表达上调.C/EBPα作为Chemerin的上游基因,可以激活 chemerin/CMKLR1信号通路,促进脂肪细胞分化.PPARγ2和adiponectin是脂肪细胞分化的标志性基因,TNF-α缺失后,在3周龄和6周龄 PPARγ2蛋白表达水平都上调,说明 TNF-α缺失促进了脂肪细胞的分化.Adiponectin蛋白表达在3周龄和6周龄时都上调,说明 TNF-α的缺失促进了脂肪细胞的分化,导致肥胖的形成. 以上结果显示，TNF-α的缺失促进了脂肪细胞的分化,可能是激活了chemerin/CMKLR1信号通路.推测 TNF-α缺失后抑制 Wnt和β-catenin靶基因的表达,进而解除了Wnt对C/EBPα的抑制作用.Chemerin的上游基因 C/EBPα表达上调,激活了chemerin/CMKLR1信号通路,促使脂肪细胞分化、肥胖发生,这为以后预防与治疗肥胖提供了新的理论依据.