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本研究主要围绕二硫键在人朊病毒蛋白分子huPrP23-231中的作用展开，首先通过体外对纯化的原核重组人正常朊蛋白硫醇基团的氧化还原过程，测定二硫键的改变对其生化特性的影响；进而探究了N端八肽重复区序列对二硫键形成的硫醇基团的氧化还原过程介导的聚集和纤维化的敏感性，最后进行了部分二硫键相关突变体质粒的构建，和真核细胞转染。蛋白沉淀实验显示重组正常人朊病毒蛋白经过硫醇基团的氧化还原过程明显增加了其聚集性，而八肽重复区缺失和插入型突变体蛋白则没有明显变化；硫磺素T(Thioflavin T，ThT)实验测定发现，经过硫醇基团的氧化还原过程重组PrP蛋白的纤维形成增多，同样的八肽重复区突变体蛋白无明显变化；圆二色谱（Circular Dichroism,CD）测定显示，处理后的重组PrP蛋白二级结构发生改变，其β-折叠结构比例显著增多，八肽重复区突变体蛋白的β-折叠则减少；蛋白酶K消化实验也进一步显示硫醇基团的氧化还原后PrP的蛋白酶K抵抗能力有所增加，而八肽重复区突变体蛋白的蛋白酶K抗性增加更明显。这些结果提示二硫键的形成可明显地改变PrP的二级结构，促进朊蛋白聚集和成纤维过程，而且正常的5个八肽重复区序列对蛋白稳定的构象转变是必需的。为进一步研究二硫键的作用，构建了二硫键相关的突变体质粒pQE30-C214G、pQE30-C179G/C214G、pQE30-M166C/E221C，并进行了测序和酶切鉴定。正在进行的和后续实验准备通过原核表达、纯化并进行硫醇基团的氧化还原过程，进行上述参数测定；并且在真核细胞中转染构建的二硫键相关突变质粒pcDNA3.1-C179G/C214G、pcDNA3.1-M166C/E221C，测定可能引起的细胞毒性和细胞保护作用。