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目的: 运用腺病毒“衣壳嵌合”策略，将肠道病毒71型（EV71）的双中和线性抗原表位嵌入到人3型腺病毒（Ad3）六邻体高变区,构建重组3型腺病毒，免疫小鼠，尝试制备对肠道病毒EV71感染所致疾病具有保护、治疗或诊断意义的单克隆抗体(mAb)；进一步探索依赖“衣窍嵌合”策略，运用病原体抗原表位制备相应mAb的可行性。 方法: 将六邻体高变区中同时嵌入EV71的SP55和SP70两个抗原表位基因的重组人3型腺病毒作为免疫原免疫BALB/c小鼠，利用杂交瘤技术与间接ELISA实验制备并筛选针对EV71的单克隆抗体。运用病毒体外微量中和实验方法测定单克隆抗体的中和活性；运用间接ELISA实验、Western blot、直接免疫荧光试验鉴定单克隆抗体识别的表位。 结果: 本研究获得了识别结合EV71特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞：D2C9、2C4、I2G2、I12C3。其中D2C9株腹水间接ELISA实验效价1：8000000，其余3株腹水效价为1：250000；Westernblot实验表明4株单抗均特异性识别EV71病毒与EV71 VP1蛋白，D2C9识别结合SP70表位肽，而2C4、I12C3、I2G2识别结合SP55表位肽；4株单抗进行直接免疫荧光法( DFA)鉴定，均对EV71阳性，而与CoxA16无交叉反应；病毒体外微量中和试验表明4株单抗隆抗体均未具备中和EV71的能力，并且D2C9能诱导出现病毒抗体依赖性增强作用现象。 结论: 本研究共获得了针对EV71 SP55肽或SP70肽的4株单抗，该4株单抗与EV71病毒亲和力高，且与CoxA16无交叉反应；本研究证明了非同属病原体的外源表位肽通过“衣壳嵌合”策略嵌入到腺病毒六邻体蛋白上，并以此作为免疫原，制备外源表位肽特异性及非同属病原体特异性单克隆抗体具有一定可行性，而由于EV71 SP55与SP70肽内中和表位均为线性表位，还需要嵌入更多的外源表位肽包括构象表位肽来进一步验证；同时4株抗体均为非中和性单抗，证明了SP55肽内至少含有一个非中和表位，SP70肽内均含有至少一个非中和表位。