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目的:针对EB病毒(Epstein-Barr Virus,EBV)感染是淋巴瘤的不良预后因素,拟研究EBNA1对伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma,BL)细胞株miR-127-5p的表达影响及调控机制;以及EBNA1和miR-127-5p对BL Raji细胞增殖凋亡的影响。在此基础上,进一步研究EBNA1通过调控miR-127-5p对BL肿瘤代谢的影响,初步探索其影响肿瘤代谢的机制。以期对EBV感染相关的BL的发病机制和治疗靶点提供一定的实验室研究基础。方法:(1)1)实时定量PCR(real-time qPCR,qRT-PCR)比较miR-127-5p在Raji和CA46细胞中的表达。2)沉默EBNA1,检测EBNA1对Raji中miR-127-5p的表达水平的影响;沉默EBNA1,用焦磷酸测序比较Raji细胞中miR-127-5p启动子区CpG岛的甲基化修饰情况。3)分别沉默EBNA1及miR-127-5p,用CCK8和流式细胞分析检测基因沉默后对Raji细胞增殖、凋亡的影响。沉默miR-127-5p,用qRT-PCR和蛋白质免疫印迹实验(Western Blot,WB)检测Raji细胞caspase3的表达变化。(2)1)利用UHPLC-QE-MS(Ultra high performance liquid chromatography-Q-exactive-Mass spectrometrty,超高效液相色谱-质谱法)对BL肿瘤细胞非靶标代谢组学检测分析,比较EBV阳性BL细胞株Raji和EBV阴性BL细胞株CA46的代谢产物差异,描绘EBV阳性与阴性BL细胞株基于液相色谱-质谱联用(liquid chromatography-Mass spectrometrty,LC-MS)的代谢轮廓。2)对miR-127-5p进行生物信息学分析,并挖掘其在肿瘤代谢的作用。(3)1)沉默miR-127-5p,用糖酵解速度分析试剂盒检测Raji细胞miR-127-5p对能量代谢的影响。2)预测miR-127-5p与代谢相关靶基因,并用WB验证miR-127-5p沉默后,Raji细胞的肿瘤代谢相关靶基因表达变化情况。结果:(1)1)本研究利用qRT-PCR发现miR-127-5p在EBV阳性的BL细胞Raji中的表达水平明显高于EBV阴性的BL细胞CA46。与部分文献报道的EBNA1调控miR-127在EBV阳性BL中高表达相符。2)成功构建了EBNA1-shRNA慢病毒并感染Raji细胞,结果显示miR-127-5p表达降低。沉默EBNA1,用焦磷酸测序发现miR-1275p启动子区CpG岛某些序列的甲基化率升高。3)再成功构建了miR-127-5p-shRNA慢病毒,分别沉默EBNA1和miR-127-5p,CCK-8和流式细胞术检测结果均显示Raji细胞增殖受抑制、细胞凋亡增多。沉默miR-127-5p,用qRT-PCR和WB均检测出caspase3表达升高。(2)1)非靶标代谢组学检测分析显示,多种代谢产物如糖酵解相关的代谢物在Raji和CA46中存在显著差异。2)在此基础上,本研究通过miRNA在线网站(http://snf-515788.vm.okeanos.grnet.gr/)发现miR-127-5p可能与肿瘤代谢相关。(3)1)沉默miR-127-5p,用Seahorse XF糖酵解速度分析试剂盒发现BL细胞Raji糖酵解水平受抑制。2)用miRNA靶基因预测数据库miRBase(http://www.mirbase.org/)、miRPathDB(https://mpd.bioinf.uni-sb.de/overview.html)、miRecords(http://c1.accurascience.com/miRecords/)找到miR-127-5p肿瘤代谢相关靶基因心磷脂酰基转移酶1(lysocardiolipin acyltransferase 1,LCLAT1/ALCLAT1)。沉默miR-127-5p,WB检测LCLAT1表达增多,与文献报道的LCLAT1过表达使可以线粒体受损,导致给肿瘤细胞供能的ATP减少,凋亡蛋白酶caspase3表达增多相符。结论:EBV阳性与阴性BL细胞株的代谢轮廓有显著差异。在EBV阳性BL细胞Raji中,(1)EBNA1可能通过降低miR-127-5p启动子区CpG岛某些序列的甲基化率,上调miR-127-5p的表达来促进细胞增殖、抑制细胞凋亡(2)miR-127-5p可以促进糖酵解水平供能,同时也可能通过靶向调控LCLAT1避免其过表达来维持线粒体的形态与功能,为肿瘤细胞提供生命活动所需的ATP。