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鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis, IB)是一种由鸡传染性支气管炎病毒(Avian Infectious Bronchitis Virus, IBV)引起的急性、高度接触传染性呼吸道疾病。它主要引起鸡呼吸道或肾脏感染,蛋鸡的产蛋数量和产蛋品质下降等。IBV为冠状病毒(Coronavirus)γ亚群的代表成员,由于其基因组易发生突变和重组,加之不同血清型之间缺乏交叉保护作用,虽然疫苗一直在广泛的使用,但IB仍不断地爆发和流行,给养禽业带来了严重的经济损失。单克隆抗体针对病毒特定的抗原表位结构,具有较强的特异性,对该病的诊断及基因工程疫苗的设计具有重要意义。N蛋白是诱导机体免疫应答和细胞免疫应答的重要免疫原蛋白。本研究以IBV N蛋白作为研究对象,制备了针对N蛋白的单克隆抗体,对IBV的诊断、预防和控制具有一定的意义。实验首先从鸡胚培养的IBV ZY3毒株尿囊液中提取基因组RNA,然后利用软件对其N蛋白抗原表位进行预测分析,设计一对特异性引物对免疫原性好、亲水性强、表位可能性大的保守片段进行了扩增,片段大小为818 bp；将其与表达载体pET-32a(+)连接并转入大肠杆菌BL21中诱导表达,SDS-PAGE检测表达的重组N蛋白大小为50kDa;用Ni-NTA Superflow纯化重组N蛋白后,采用抗鸡IBV血清与之进行Western blot反应以检测其反应原性,结果显示重组蛋白反应原性良好。采用纯化的重组N蛋白加以弗氏佐剂对BALB/c小鼠进行免疫,通过间接ELISA方法检测,发现免疫后的小鼠均能产生高效价的抗体,可用于细胞融合。将SP2/0细胞与免疫小鼠脾细胞进行融合,融合后2周左右用间接ELISA方法对其进行抗体效价检测,将筛选到的阳性细胞孔进行3-4次亚克隆化,最终得了2株能稳定分泌抗重组N蛋白抗体的杂交瘤细胞,分别命名为2833和4E10。经测定,2株单抗亚类分别为IgGl和IgM,轻链均为K链；通过腹水诱导法大量制备的腹水和细胞培养上清抗体效价分别大于106和1：640；这两株单克隆抗体具有良好的特异性,均能与IBV N蛋白发生特异性的反应；经检测,2株杂交瘤细胞均具有良好的传代稳定性。这两株抗IBV N蛋白单克隆抗体研制的成功,对进一步研究IBV N蛋白及建立鸡传染性支气管炎的诊断方法有重要意义。