论文部分内容阅读
目的:研究SB-216763激活人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路对促进骨关节炎发生、发展的分子机制，并探讨补肾活血方对人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。
方法:本研究通过WesternBlot、ELISA、CCK等分子生物学技术，以正常人滑膜细胞(HS)为研究对象，采用GSK-3β选择性小分子抑制剂SB-216763干预正常人滑膜细胞，检测人滑膜细胞胞核蛋白β-catenin的表达变化，找出激活Wnt/β-catenin信号通路的最佳时间点;采用CCK方法观察补肾活血方对人滑膜细胞的生长抑制作用;采用WesternBlot观察补肾活血方对人滑膜细胞胞核蛋白β-catenin和胞浆蛋白CyclinD1、MMP-7表达的影响;采用ELISA法检测补肾活血方对人滑膜细胞上清液中CyclinD1、MMP-7、MMP-2和MMP-9表达的影响。
结果:免疫印迹法(WesternBlot)结果显示GSK-3β选择性小分子抑制剂SB-216763作用于人滑膜细胞后，胞核蛋白β-catenin的表达水平明显升高，并随着GSK-3β选择性抑制剂作用时间的延长，β-catenin的表达逐渐增强，呈时间依赖性，而在其干预的第48h，胞核蛋白β-catenin的表达变化最明显;同时，补肾活血方能够明显下调胞核蛋白β-catenin和胞浆蛋白CyclinD1、MMP-7的表达水平;酶联免疫吸附法(ELISA)结果显示Wnt/β-catenin信号通路激活后人滑膜细胞上清液中CyclinD1、MMP-7、MMP-2和MMP-9的表达明显高于正常人滑膜细胞上清液;同时，补肾活血方能够明显下调滑膜细胞上清液中CyclinD1、MMP-7、MMP-2和MMP-9的表达。
结论:GSK-3β选择性小分子抑制剂SB-216763能够明显上调胞核蛋白β-catenin的表达，通过抑制GSK-3β的表达阻止GSK-3β对β-catenin的磷酸化，导致胞核蛋白β-catenin的累积，过量的β-catenin从胞质中进入细胞核，成功激活人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路;补肾活血方通过抑制人滑膜细胞中胞核蛋白β-catenin在胞浆内累积，导致β-catenin从细胞质中进入细胞核的数量减少，从而阻断Wnt/β-catenin信号通路，下调CyclinD1、MMP-7、MMP-2和MMP-9在人滑膜细胞中的表达，这可能是补肾活血方通过调控滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路，抑制滑膜增生，减轻滑膜炎症，阻止关节软骨降解，促进软骨修复，从而达到治疗膝骨关节炎的作用机制之一。