【摘 要】
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在该论文的工作中,我们以La作为稀土离子的代表,在分子水平以及细胞层次上研究了La对钙调蛋白的作用,得到了以下的结果.首先,我们应用核磁共振、荧光、圆二色散、MALDI-TOF-M
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在该论文的工作中,我们以La<3+>作为稀土离子的代表,在分子水平以及细胞层次上研究了La<3+>对钙调蛋白的作用,得到了以下的结果.首先,我们应用核磁共振、荧光、圆二色散、MALDI-TOF-MS和停流荧光实验全面和深入地研究了La<3+>与钙调蛋白作用的热力学以及动力学性质.在La<3+>-CaM二元复合物的研究基础上,我们进一步研究了La<3+>对钙调蛋白功能的影响.在以钙调神经磷酸酶(CaN)为对象的研究中,我们发现,在一定浓度的Mn<2+>存在下,无论是否存在钙调蛋白,La<3+>均可以激活CaN.进一步的实验表明,低浓度的La<3+>与钙调蛋白结合后尽管不影响钙调蛋白与CaN的结合,但是降低钙调蛋白对CaN的激活功能;高浓度的La3+明显削弱钙调蛋白对CaN的激活,其原因在于高浓度的La<3+>显著抑制了钙调蛋白与CaN的结合.CaN的有限胰蛋白酶水解实验证实,La<3+>是通过对CaN活性调节区的直接作用激活CaN的.对于NIH 3T3细胞,La<3+>可以在胞外通过钙调蛋白非依赖的(CaM-independent)途径激活ERK.进一步的实验表明,La<3+>激活NIH 3T3细胞ERK信号的有效作用形式是游离La<3+>,其半激活浓度约为10 mol/L;La<3+>的激活可以在数分钟内发生,提示可能涉及受体活化,但RT-PCR排除了钙离子受体参与的可能性,同时,ERK的激活不伴随胞内钙离子浓度的上升.以上结果提示La<3+>可能通过在NIH 3T3细胞膜上的某种阳离子感受受体激活ERK.
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