论文部分内容阅读
CP7菌是导师课题组筛选出来的能产生抗菌活性物质的多粘类芽孢杆菌。前人研究结果表明，CP7菌在其新陈代谢过程中可以产生三种不同的抗菌蛋白，其中的抗革兰氏阳性菌组分Cpacin是由本课题组发现的新的抗菌肽，它对多种动植物病原菌有很好的活性作用。开展对新抗菌肽Cpacin的进一步研究，有重要的意义。
本研究还利用日本山川稔教授提供的纯度为95％的重组柞蚕抗菌肽morincin，对人类常见的2种癌症的细胞株进行了抑杀效果及作用机理的研究。
主要的研究结果如下：
1、初步探明了CP7菌抗菌肽对pH值的适应范围较宽。抗革兰氏阴性菌组分，在强碱和强酸的条件下，其活性也不会完全消失，即pH在10以下稳定；抗革兰氏阳性菌组分，pH在10以下可以保持活性，pH在10以上时，其抗菌活性会消失。
2、明确了CP7菌抗细菌的活性组分对市售标准胃蛋白酶、胰蛋白酶、蛋白酶k，以及制备的猪小肠食糜酶和鸡小肠食糜酶等多种酶不敏感。
3、用新型的CCK—8试剂盒检测到Cpacin对癌细胞有显著的活性作用，呈明显的剂量和时间效应。研究结果还表明，Cpacin对癌细胞的活性作用，最终造成细胞破膜穿孔，胞内物质泄出，细胞崩坏。其对癌细胞引起的破坏作用是激烈的物理性的破坏作用。
4、探明了重组柞蚕抗菌肽Moricin对癌细胞有显著的活性作用，并对其机理进行了研究。实验利用传统的MTT方法证明了该抗菌肽对癌细胞有显著的杀伤抑制作用，呈现剂量和时间依赖关系。显微镜下观察，可看到处理细胞内颗粒增多，细胞颜色加深，细胞变圆变小，细胞液浑浊，细胞内容物泄漏，最后崩坏。扫描电镜观察，可看到细胞表面无规则突起和伪足逐渐收缩直至完全消失，最后细胞完全崩坏。透射电镜观察可以看到线粒体电子密度增大、变黑，肿胀，继而内嵴脱落成囊泡状；细胞表面无规则突起消失，染色质凝聚或边移；随后癌细胞内部结构严重破坏，细胞器损毁，细胞膜破裂穿孔，细胞内容物泄出胞外；最后整个细胞崩解，是激烈的、物理性的不可逆损伤。
5、用免疫组化法检测A549细胞经重组柞蚕Moricin作用后对多药耐药基因MDR1的表达。经重组柞蚕Moricin处理以后，显著地降低了MDR基因产物Pgp蛋白在癌细胞中的表达，从而使癌细胞失去了大部分的耐药性的本能。推测这是一些抗菌肽对肿瘤细胞的活性作用的机理之一。该研究结果，在抗菌肽对肿瘤细胞的活性作用方面尚未见报道。