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视网膜脱离是引起视功能损害的常见眼病之一，随着基础研究和手术技巧的日臻完善，视网膜脱离手术后的解剖复位率已明显提高，但术后视功能恢复尚不理想。研究表明：视网膜脱离后视细胞凋亡、外节变性及不完全再生是术后视功能不良的主要原因。神经生长因子(NGF)具有神经元营养和促突起生长的双重效应，对神经元的生长、发育、分化及再生和功能性表达均具有重要的调控作用。在病理状态下，不仅能保护神经元、减少其凋亡的发生，而且还能增强神经元对病理环境的适应能力。 目的：本研究通过建立兔视网膜脱离模型，设立NGF治疗组、生理盐水(NS)模型组，经系统观察视网膜结构和功能的动态变化，评价NGF是否对视细胞损伤具有保护作用及其程度，从而为进一步将外源性NGF应用于临床治疗提供理论和实验依据。 郑州大学2002年硕士毕业论文 神经生长因子对视网膜脱离视细胞保护作用的实验研究 方法：本实验分三部分实施：动物选用健康青紫兰兔，体 重2．5～3．skg，雌雄兼用。A．生化检测组：54只随机分为 正常对照组、NGF治疗组和 NS模型组，每组 18只，分3天、7天 和 14大三个小组，每组6只。视网膜脱离模型制作后，NGF治疗 组每天结膜下注射NGFO．lml＊峪加），B．i．d；NS模型组每大结 膜下注射昭．lml，B i．d。实验动物于3天、7天和 14天后以空 气栓塞法处死，取玻璃体用高效液相色谱分析法作游离氨基酸 测定；脱离视网膜做一氧化氮州人丙二醛mDA）含量测定。 探讨NGF应用后眼后段生化指标的改变。B．光、电镜组：26只 随机分为正常对照组6只、NGF治疗组10只和NS模型组10只，分 3大、7大和 14天三个小组。除NGF治疗 3大组、NS模型 3大组6只 外，余2只。具体实验方法同前，动物处死后，取脱离眼球壁 做光、电镜检查，正常对照组剪取相应部位，常规HE染色，光 学显微镜下观察视网膜组织形态学变化；透射电镜观察超微结 构变化；3天组加末端脱氧核昔酸转移酶介导的生物素化尿昔 三磷酸缺口末端标记厂UNEL）法染色光镜下1000倍视野观察视 细胞凋亡情况。C．14大光镜组：18只将动物随机分为正常对 照组、NGF治疗组和 NS模型组 3组，每组6只，具体实验方法同 前，动物于14大后处死，取脱离眼球壁做光镜检查，经计算机 图像分析系统400倍光镜下测量视网膜外核层厚度；光镜下1000 倍视野观察视细胞数，作为用药后观察视网膜结构损伤程度的 定量指标。 结果：门）生化检测组 玻璃体兴奋性氨基酸－谷氨酸 2 郑州大学2002年硕士毕业论文 神经主长因子对视网膜脱离视细胞保护作用的实验研究 门LU）检测：NGF治疗 3、7大组玻璃体内 GLU浓度①．3 5士 1．17；19．39士4＊8）pmol／L低于NS模型3、7天组玻璃体内GLU 浓度（15．18士 l．87；29．04土 4．25）umol几，两者相比差异有显 著性（P＜o．01；P＜O．05）；NG F治疗14天组玻璃体内GL U浓度 （1．58土2．65）pmol／L，与NS模型14天组（15．44士3．gi）pmoll 相比差异无显著性（P＞0．05人 视网膜NO含量检测：NGF治疗 3天组视网膜内NO浓度（23．90土7．64）卜mo炒低 于贴模型3 天组（45二 9土 11．61）卜moVgpr，两者相比差异有显著性 ？叼．05人 视网膜MD A含量检测：NG F治疗3、7和14天组视 网膜内MDA浓度（159．71士23＊9；216．72土12．15；151．71土 29．38）nmo＊mgpr与NS模型组3、7和 14天MDA浓度 （16．58士 26．19；219．46土15．44；154．57土23．39）nmol／mgpr相比，两 者差异无显著性（P＞0刀5人门）光、电镜检查组 光、电镜 检查视网膜脱离后3天，NGF治疗组和NS模型组视网膜内九层结 构改变不明显，但外核层可见散在凋亡细胞；视网膜脱离后7、 14天组两组比较，NGF治疗组内、外节损害较轻、视细胞数较 多、外核层较厚、视网膜结构和层次排列较好。TUNEL染色显 示正常兔视网膜外核层细胞染色阴性，视网膜脱离后3天外核 层可见较多散在分布的阳性细胞；NGF治疗组视网膜外核层凋。亡细胞计数每高倍镜视野门．60土0．46）个，与NS模型组以．10 土0．53）个相比，两者差异有显著性（P＜0刀1）。（3）视网膜 外核层厚度及细胞计数 视网膜脱离后 14天外核层厚度NGF治 疗组为（14．35士0．99）卜m，与NS模型组（10．70土0．98）卜m 3 郑州大学2002年硕士毕业论文 神经生长因子对视网膜脱离视细胞保护作用的实验研究 相比差异有显著性（P＜0刀1入 ＊＊F治疗组视网膜外核层细胞 计数每高倍镜视野为门09．47士15．15）个，与NS模型组格5．6