【摘 要】
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目的:研究溶酶体组织蛋白酶L(Cathepsin L)在6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的SH-SY5Y细胞死亡中的作用,初步探讨Cathepsin L在帕金森病发病中的机制。方法:采用6-OHDA处理人神经
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目的:研究溶酶体组织蛋白酶L(Cathepsin L)在6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的SH-SY5Y细胞死亡中的作用,初步探讨Cathepsin L在帕金森病发病中的机制。方法:采用6-OHDA处理人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞建立帕金森病(PD)细胞模型,处理组在6-OHDA给药前加入选择性Cathepsin L抑制剂Z-FY-DMK(10μM),用乳酸脱氢酶(LDH)活性检测法及Annexin V和PI双染的方法观察Z-FY-DMK对6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞死亡的作用。免疫组化、Western blot法观察Cathepsin L在6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞死亡中的分子机制。结果:用6-OHDA处理后,免疫组化结果显示,Cathepsin L从溶酶体异位到细胞质,Western Blot结果显示,Cathepsin L表达量明显增加。LDH和Annexin V、PI双染结果显示,Z-FY-DMK能减轻6-OHDA的细胞毒性,并且部分抑制6-OHDA所诱导的凋亡。Western Blot结果表明,Z-FY-DMK处理组全长Bid表达增加,且部分抑制了6-OHDA所诱导的NF-kB核转位,而IkB-α的表达恢复到正常水平,凋亡相关蛋白Bax、P53、PUMA、Caspase-3表达量减少及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达上调。结论:Cathepsin L在6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞死亡过程中发挥重要作用。在6-OHDA的作用下,激活的Cathepsin L一方面从溶酶体释放到细胞质,降解IKB-α,与NF-κB介导的神经元凋亡通路相关联,共同调控SH-SY5Y细胞死亡,另一方面,Cathepsin L可能通过剪切Bid成为tBid,最终激活内在凋亡通路。
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