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母胎免疫关系的平衡是胚胎成功附植的关键,任何一方的免疫失衡都会造成妊娠过程的失败,该过程受到免疫细胞、细胞因子及细胞粘附因子等的调控。玉米赤霉烯酮(ZEA)是由镰刀菌属真菌产生的霉菌毒素,是农作物中常见的污染物。ZEA可以通过农作物进入食物链,从而对动物和人类的健康造成许多不利的影响。ZEA进入机体后,会扰乱体内的免疫系统,产生免疫毒性,从而影响胚胎附植。本研究选取体重相近的20头母猪,随机分配为四组,在妊娠的第8-14天分别饲喂含ZEA浓度为0mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、10mg/kg的日粮。第21天采样后完成了着床胚胎数据的分析,脾脏HE切片,血清免疫球蛋白分析和细胞因子浓度检测,脾脏细胞因子的mRNA水平和蛋白水平分析,并在分离培养猪的脾淋巴细胞的基础上,完成了ZEA处理的细胞活性检测,旨在探讨ZEA对胚胎附植期母猪免疫系统功能的影响。 主要研究结果如下: 1.胚胎附植饲喂高浓度的ZEA引起猪胚胎体积变小;高浓度ZEA(30mg/kg)导致小鼠产仔数减少和初生重降低。 2.不同水平ZEA处理组没有引起妊娠早期母猪的脾脏组织结构发生明显的病理学变化。 3.血清生化分析结果发现ZEA处理影响妊娠母猪的体液免疫:不同浓度ZEA处理组IgG的浓度显著下降,10mg/kg ZEA导致IgA的浓度极显著降低、IgM的浓度极显著升高;利用RT-qPCR技术检测ZEA对脾脏中IgA、IgG、IgM的相对表达量的影响,结果显示不同水平ZEA处理组导致IgA和IgG的mRNA表达水平显著降低,IgM的mRNA表达水平显著升高。 4.ZEA处理影响血清中细胞因子的含量:对血清中细胞因子的浓度进行ELISA检测,发现ZEA处理导致IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α、IL-10的浓度升高,且IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10的浓度在高剂量ZEA(10mg/kg)处理组变化显著。 5.ZEA处理影响脾脏中细胞因子的表达:1mg/kg和2mg/kg ZEA处理导致IL-2、IL-6和TNF-α的mRNA表达水平显著增加,2mg/kgZEA处理导致IL-1β、IL-8的mRNA表达水平极显著增加,10mg/kg ZEA处理导致IL-10的mRNA表达水平显著降低,不同水平的ZEA处理对IFN-γ的mRNA表达水平没有影响;Western blot结果发现,低浓度ZEA处理组(1mg/kg和2mg/kg)IL-1β、TNF-α、IFN-γ的蛋白水平随着ZEA处理浓度增加而升高。 6.细胞体外试验表明:随着ZEA处理浓度的增加,显著抑制猪脾淋巴细胞的增殖,并有浓度依赖性。 7.结论:ZEA在母猪胚胎附植过程中,通过影响母猪体内细胞因子和免疫球蛋白的表达及合成,引起母猪的全身性炎症反应,造成免疫紊乱,破坏子宫免疫微环境的平衡,不利于胚胎附植。