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目的:
通过免疫组化和Real-time PCR研究大鼠牙髓损伤后串珠素及β1整合素的表达变化，探讨串珠素在牙髓损伤修复过程中的作用及其可能的机制。
方法:
1.收集健康成年SD大鼠上颌骨磨牙联合标本，对比单纯EDTA溶液脱钙和EDTA溶液加微波辐射脱钙所需时间、包埋后切片质量及HE染色效果。
2.收集牙髓损伤后第1、3、5、7d的SD大鼠一侧上颌骨磨牙联合标本，对侧未损伤标本作为对照，采用EDTA溶液加微波辐射脱钙，石蜡包埋后近远中向切片，免疫组化染色，显微镜下观察串珠素和β1整合素在牙髓中的表达变化，并采用IPP软件分析各组间平均光密度差异。
3.收集牙髓损伤后第1、3、5、7d的SD大鼠一侧上颌磨牙牙髓标本，对侧未损伤标本作为对照，Trizol法提取牙髓组织的总RNA，检测OD260/280值并计算RNA浓度，逆转录后采用荧光定量PCR检测串珠素和β1整合素的mRNA相对表达量变化。
结果:
1.大鼠上颌骨磨牙联合标本单纯采用EDTA溶液脱钙需24～32d，采用EDTA溶液加微波辐射脱钙所需为时间为2.5～3h，明显少于单纯采用EDTA溶液脱钙，而染色效果无明显差异。
2.牙髓损伤以后1d，串珠素于穿髓点附近的炎症细胞浸润区下方的牙髓组织阳性表达;3d时，在炎症细胞浸润区和附近的牙髓组织及与牙本质交界处有阳性表达;5d时，串珠素在炎症细胞浸润区弥散性阳性表达;7d时，串珠素在炎症细胞浸润区与坏死组织交界处有强阳性表达。对照组正常牙髓组织串珠素有弥散性弱阳性表达。串珠素阳性表达较强的位置随着炎症进展的前沿分布，损伤后的牙髓组织染色强度明显高于对照组(P＜0.05)，并以1d组升高最为明显。β1整合素在牙髓损伤后3d开始在炎症坏死牙髓及下方相对正常牙髓中均阳性表达，染色强度在损伤后的3、5、7d组牙髓组织中明显高于对照组(P＜0.05)。
3.所提取的大鼠牙髓组织总RNA的OD260/280值均在1.8～2.0之间，具有良好的纯度和完整性。荧光定量PCR检测串珠素mRNA相对表达量，发现在牙髓损伤以后1d开始明显下降，在3、5、7d组中逐渐回复，但仍低于对照组(P＜0.05)。β1整合素mRNA的相对表达量在1d组开始升高，各实验组的相对表达量均明显高于对照组(P＜0.05)。
结论:
1.采用EDTA溶液加微波辐射对大鼠上颌骨磨牙联合标本进行脱钙能提高效率而不影响染色效果，可用于后续实验中各标本的脱钙。
2.大鼠牙髓损伤后串珠素和β1整合素表达增加，而且串珠素阳性表达较强的位置随着炎症进展的前沿分布，提示串珠素可能通过调节牙髓组织的血管生成作用和炎症细胞的浸润，参与牙髓组织的损伤修复过程。
3.大鼠牙髓损伤后串珠素mRNA表达降低，提示牙髓损伤后串珠素表达增加并不是由它的生物合成增加所致，具体机制仍有待探讨。