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研究目的喉癌、下咽癌是恶性程度极高的一种肿瘤，以鳞癌多见，约占全身恶性肿瘤的1-5%，常伴有周围淋巴结的转移，目前手术切除是治疗此类疾病的主要方法。此类肿瘤的发生是多因素协同效应的结果。其中，慢性炎症在咽喉部肿瘤的发生、发展过程中起重要作用。Toll样受体(Toll-like receptor，TLR)是重要的模式识别受体(pattern recognitionreceptor，PRR)家族，识别高度保守的微生物成分-病原相关分子模式(pathogen-associatedmolecular pattern，PAMP)以及内生性损伤信号相关分子模式(damage-associated molecularpattern，DAMP）。TLR是经典的跨膜蛋白，作为最具特征性的模式受体分子，TLR可以募集多种配体蛋白，激发信号转导，导致特异性转录因子的活化，最终产生抗菌肽、促炎性细胞因子和趋化因子、抗病毒细胞因子、黏附分子以及其它活性因子。研究发现，TLR不仅在免疫细胞中表达，还在多种恶性肿瘤细胞，尤其是炎症相关性肿瘤细胞呈现高表达，并且在肿瘤的发生、发展和治疗中发挥重要作用。本研究拟在转录水平及蛋白水平研究TLR2、3和4在喉癌及下咽癌组织中的表达情况，并以癌旁组织及息肉组织为对照。在本研究结果的基础上，参考并结合其他研究成果，探讨TLR2、3和4在喉癌及下咽癌发生、发展、侵袭及转移过程中的作用，以期为癌症的临床诊断、预防及治疗提供更多的科研思路。研究方法和结果1. RT-PCR法检测TLR2、3和4mRNA在不同组织中的表达水平1.1TLR2、3和4mRNA在癌组织与息肉组织中的表达差异TLR2、3和4在癌组织中均有表达，而在息肉组织中几乎不表达。其中TLR4表达最强，其次是TLR2。TLR2、3和4在癌组织中的表达强度显著强于息肉组织，TLR2t值=6.723，TLR3t值=4.976，TLR4t值=7.645。P <0.01。统计学分析结果具有显著意义。1.2TLR2、3和4mRNA在癌组织与癌旁组织中的表达差异TLR2、3和4mRNA在癌组织及癌旁组织中均有表达，它们在癌组织中的表达强度显著高于癌旁组织，分别为: TLR2t值=6.179，TLR3t值=4.831, TLR4t值=6.057，P <0.01。统计学分析结果具有显著意义。1.3TLR2、3和4mRNA在不同肿瘤分期的中的表达差异TLR2、3和4mRNA在肿瘤临床分期及TNM分期中的表达有显著差异，其表达强度随分期增加而增强。ANOVA分析结果：临床分期中：TLR2F值=5.150，TLR3F值=3.700，TLR4F值=4.862，P均<0.05。TNM(N)分期中：TLR2F值=5.562，TLR3F值=7.200，TLR4F值=15.039，P <0.05。统计学分析结果均具有显著意义。1.4TLR2、3和4mRNA在癌组织病理学分级中的表达差异TLR2、4mRNA在癌组织中的表达强度与肿瘤恶性程度显著相关，TLR3mRNA在癌组织中的表达强度与肿瘤恶性程度无显著统计学意义。2. Westeron blot法检测TLR2、4蛋白在不同组织中的表达水平2.1TLR2、4蛋白在癌组织与息肉组织中的表达差异TLR2、4蛋白在癌组织中的表达强度明显高于息肉对照组织。2.2TLR2、4蛋白在癌组织与癌旁组织中的表达差异TLR2、4蛋白在癌组织中的表达强度明显高于癌旁组织。2.3TLR2、4蛋白在不同肿瘤分期的中的表达差异TLR2、4蛋白在癌组织中的表达强度随肿瘤临床分期及TNM分期的增加而增强。2.4TLR2、4蛋白在肿瘤组织病理学分级中的表达差异TLR2、4蛋白在癌组织中的表达强度随肿瘤恶性程度的增加而表达增强。3.免疫组化法检测TLR2、4蛋白在细胞中的表达部位。在细胞膜与细胞质内均可见抗体结合反应，表明TLR2及TLR4表达于细胞膜与细胞质内。研究结论：1. TLR2、3和4mRNA及TLR2、4蛋白在喉癌、下咽癌癌组织中的表达较为普遍，而在息肉组织中基本不表达。2. TLR2及TLR4表达于细胞膜与细胞质内。3. TLR2、3和4mRNA及TLR2、4蛋白在喉癌、下咽癌癌组织中的表达强度较在癌旁组织显著增强。4. TLR2、3和4mRNA及TLR2、4蛋白在喉癌、下咽癌癌组织中的表达强度随肿瘤临床分期的增加而增强。5. TLR2、3和4mRNA及TLR2、4蛋白在喉癌、下咽癌癌组织中的表达强度随肿瘤N分期的增加而增强。6. TLR2、4mRNA及蛋白在癌组织中的表达强度与肿瘤恶性程度显著相关，TLR3mRNA及蛋白在癌组织中的表达强度与肿瘤恶性程度无显著统计学意义。研究意义本课题明确了喉癌、下咽癌组织中TLR2、3和4在转录水平及TLR2、4在蛋白水平的表达情况及表达部位，以及TLR2、3和4的表达水平与肿瘤分期及淋巴结转移的关系，为临床应用提供理论依据。