EGFR/FGFR双靶点抑制剂BZF2抗肺癌细胞EGFR-TKIs耐药的活性研究

• 作 者: 潘雅倩
• 机 构: 温州医科大学
• 出 处: 温州医科大学
• 发表日期: 2019年期
• 关键词: 肺癌

目的：EGFR抑制剂在临床上广泛用于治疗非小细胞肺癌，但随着用药时间的延长，不可避免的会出现耐药问题。研究表明FGF2-FGFR1的旁路激活是导致耐药产生的原因之一，而EGFR和FGFR抑制剂的联用可以解决耐药问题，但是毒副作用和药物的相互作用限制了其实际应用。因此开发和研制对激酶选择性高，活性好的EGFR和FGFR双靶点抑制剂来解决EGFR抑制剂的耐药问题是非常具有价值的。我们将在研究中，评价优势化合物BZF2的体内外抗肿瘤效果，和探讨克服耐药的机制。
　　方法：
　　(1)选取EGFR高表达细胞A431，PC-9和FGFR1高表达细胞H520，H1581和EGFR和FGFR1都表达的细胞H226，通过MTT的方法筛选出优势化合物。
　　(2)再通过激酶筛选的方法，Westernblot法和分子对接的方法，评价优势化合物BZF2对激酶的选择性和抑制效果，考察化合物BZF2对EGFR和FGFR1蛋白的自磷酸化和下游通路AKT的抑制效果和探究化合物和靶点相互作用的分子机制。
　　(3)在细胞层面，先通过MTT细胞抗增殖实验，集落形成实验，细胞凋亡实验，细胞周期实验，细胞划痕实验，来评价化合物BZF2对耐药细胞HCC827GR的抗肿瘤活性，再通过Westernblot验证抗肿瘤机制。
　　(4)在动物层面，将耐药细胞HCC827GR接种于裸鼠，接种成功后，将裸鼠分三组，空白组，实验组，阳性药组。每日给药，观察裸鼠的健康状况，记录体重变化。若干天后取瘤，称瘤重，组织留做免疫组化。
　　结果：
　　(1)细胞筛选结果表明，化合物BZF2对5种细胞的抑制效果好，优于BZY,BZF,BZQ系列中的其他化合物，所以选择BZF2为优势化合物。
　　(2)激酶筛选的结果表明，BZF2在10μM的浓度下对EGFR的各亚型和突变型和对FGFR1的激酶的抑制效果好，选择性高。Westernblot结果显示，BZF2对EGFR和FGFR1蛋白的自磷酸化及其下游通路AKT有明显抑制作用，而分子对接的结果明确BZF2与EGFR和FGFR1特定氨基酸存在相互作用。
　　(3)细胞层面的结果显示，化合物BZF2能抑制耐药细胞的生长繁殖，诱导耐药细胞的凋亡，阻滞耐药细胞于G1期，影响耐药细胞的迁移。分析HCC827GR的Westernblot结果，可得BZF2对EGFR和FGFR1蛋白的自磷酸化及其下游通路AKT有抑制作用。
　　(4)动物层面显示，在异种移植模型中，和空白组相比，化合物BZF2在30mg/kg剂量下，能明显抑制肿瘤生长作用。而和G和BGJ398联合用药组比，抑制肿瘤的效果略差，此结果和免疫组化的结果一致。药代动力学结果显示，BZF2口服吸收快，体内稳定，半衰期长。
　　结论：BZF2是新型的具有高活性和选择性的EGFR和FGFR双靶点抑制剂，可解决EGFR-TKIs的耐药问题。