【摘 要】
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捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)属毛圆科(Trichostrongylidae)血矛属(Haemonchus)线虫,分布较广,寄生于反刍动物第四胃和小肠,因吸血可导致贫血和衰弱,引起幼龄动物,尤
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捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)属毛圆科(Trichostrongylidae)血矛属(Haemonchus)线虫,分布较广,寄生于反刍动物第四胃和小肠,因吸血可导致贫血和衰弱,引起幼龄动物,尤其是羔羊死亡,对畜牧业造成极大经济损失.凝集素在植物中的研究已有一百多年的历史,但在线虫中的研究相对较晚,尤其是捻转血矛线虫半乳糖结合凝集素(galectin)的研究只有将近十年的时间.1994年,Smith从捻转血矛线虫肠道粘膜分离到一种糖蛋白复合物--H-gal-GP,用其免疫羔羊然后攻虫,发现具有免疫保护性.此后,捻转血矛线虫的galectin基因不断被克隆和鉴定,作为疫苗的候选抗原也逐渐受到关注.国内在该领域的研究尚属空白,因而我们开展了此项研究,主要进行了以下工作:1.捻转血矛线虫雌、雄成虫半乳糖结合凝集素基因的克隆、鉴定及序列分析根据GenBank中发表的捻转血矛线虫galectins基因序列,设计一对引物.分别以山羊捻转血矛线虫雌、雄成虫的总RNA为模板,采用RT-PCR技术,均扩增出约880bp的产物.2.捻转血矛线虫不同发育阶段galectin基因的表达状况检测分别以山羊捻转血矛线虫虫卵、第三期幼虫以及雌、雄成虫的总RNA为模板,应用galectin特异性引物P1和P2进行RT-PCR扩增,检测不同发育阶段galectin的表达状况.3.捻转血矛线虫雌、雄成虫galectin基因的原核表达及表达产物的变、复性研究分别将捻转血矛线虫雌、雄成虫的galectin基因亚克隆入pBV220原核表达载体,经双酶切和PCR鉴定筛选出阳性重组质粒.4.捻转血矛线虫雌、雄成虫重组galectin蛋白的红细胞凝集活性分析采用人和山羊、犬、兔、鸡和小鼠的红细胞悬液分别测试捻转血矛线虫雌、雄成虫重组galectin蛋白的血凝活性,结果表明,这两种重组蛋白均具有血型专一性,在80μg/ml浓度下,对人的B型红细胞和犬红细胞具有较高的凝集活性,对兔和小鼠的红细胞具有较低的凝集活性.5.捻转血矛线虫雌、雄成虫重组galectin蛋白对IL-2诱导的山羊淋巴细胞产生细胞因子的影响采取捻转血矛线虫感染前、后的山羊外周血分离淋巴细胞,经重组的牛IL-2诱导,分别加入雌、雄成虫重组galectin蛋白,应用半定量RT-PCR方法检测细胞因子TNF-α和IFN-γ mRNA表达水平的变化.
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