结缔组织生长因子在红色闪烁光诱导豚鼠近视眼巩膜内的表达

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目的研究在红色闪烁光诱导豚鼠近视眼巩膜中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)的表达,探讨CTGF在近视发展过程中的作用和机制。方法选择健康、出生15~20天的豚鼠30只,检影验光双眼屈光度在(+2.50D~+3.50)D之间,相差(0~+0.50)D,雌雄兼顾。随机分为3组,每组10只。Ⅰ组用明2s、暗2s的红色闪烁光照射,放在完全密闭的纸箱中饲养;Ⅱ组用正常自然光照射,放在四周密闭而上方开放的纸箱中饲养;Ⅲ组用正常自然光照射,放在视野开阔的笼中饲养。分别在实验前、实验8周时用散瞳检影验光法测量3组动物的屈光度,用A超测量眼轴长度。经检影验光及测定眼轴长度后,用过量麻醉法(3%戊巴比妥钠)处死动物,摘除眼球,去除结膜、筋膜、眼外肌、脂肪、视神经,然后用剪刀沿赤道部环形剪开眼球壁,去除眼前节组织与玻璃体,用无齿镊剥离视网膜,用小剪刀剥离并刮除脉络膜,取后极部巩膜用免疫组织化学法和Western-blot法检测豚鼠巩膜中CTGF的表达。结果1、豚鼠屈光度和眼轴长度的变化:实验前,Ⅰ组屈光度为(+3.04±0.65)D,眼轴长度为(7.50±0.29)mm,Ⅱ组屈光度为(+3.10±0.52)D,眼轴长度为(7.49±0.19)mm,Ⅲ组屈光度为(+2.85±0.89)D,眼轴长度为(7.47±0.36)mm,统计学分析,3组间屈光度和眼轴长度无显著性差异(P>0.05)。实验8周后,Ⅰ组屈光度为(-8.25±0.78)D,眼轴长度为(8.82±0.16)mm,Ⅱ组屈光度为(+0.75±0.56)D,眼轴长度为(7.90±0.30)mm,Ⅲ组屈光度为(+1.72±0.65)D,眼轴长度为(7.78±0.54)mm,统计学分析,Ⅰ组诱导出近视,且伴有眼轴的增长,与Ⅱ、Ⅲ组屈光度和眼轴长度均有显著性差异(P<0.01)。Ⅱ组与Ⅲ组相比两组间屈光度和眼轴长度均有显著性差异(P<0.01)。2、免疫组织化学法检测豚鼠近视眼巩膜中CTGF蛋白的表达:实验8周后3组后极部巩膜组织中免疫组化学染色实验均能检测到CTGF蛋白的表达,阳性表达率分别为(40.21±0.65)%、(15.04±0.59)%、(10.36±0.78)%,Ⅰ组CTGF阳性表达率明显高于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.01),Ⅱ组明显高于Ⅲ组(P<0.05),差异有统计学意义。3、Western-blot检测CTGF在巩膜内表达的变化:经ECL系统分析,3组CTGF蛋白与内对照β-actin比值的平均值分别为:1.21±O.06、0.79±0.02、0.62±0.13,其结果与免疫组织化学实验结果一致。结论1、红色闪烁光照射8周后,豚鼠双眼屈光度数显著下降,眼轴增长,表现为明显近视。2、红色闪烁光诱导豚鼠近视眼后极部巩膜中CTGF的表达明显增强。
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