【摘 要】
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目的:骨形成蛋白具有诱导未分化间充质细胞向成骨细胞、成软骨细胞分化,促进新骨形成的作用;随着研究的深入,发现骨形成蛋白家族不仅具有诱导成骨功能,还具有调控胚胎发生发
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目的:骨形成蛋白具有诱导未分化间充质细胞向成骨细胞、成软骨细胞分化,促进新骨形成的作用;随着研究的深入,发现骨形成蛋白家族不仅具有诱导成骨功能,还具有调控胚胎发生发育、营养神经及调控某些肿瘤的发生与生长的作用.由于其具有广泛的生物学活性,特别是在骨损伤治疗等方面所显示的良好应用前景,人们将关注点集中在利用骨形成蛋白进行基因治疗的研究中,初步研究结果已显示出了诱人前景.本研究利用腺病毒感染种类广泛,不整合宿主细胞基因、无潜在的致突变性,且较易获得高滴度病毒、转染效率高等特点,以复制缺陷型腺病毒为载体构建了含人骨形成蛋白2基因(hBMP-2)的重组腺病毒表达载体,并转染人胚肺成纤维细胞,观察成纤维细胞被重组腺病毒表达载体转染后在成骨活性方面的影响,为后续体内实验研究奠定基础.结论:采用体外连接技术成功构建了含hBMP-2基因的重组腺病毒表达载体,且体外连接技术较传统的同源重组方法简便,并避免了在同源重组过程中产生增殖性腺病毒的可能;同时体外实验见人胚肺成纤维细胞在转染重组腺病毒后,细胞形态发生改变、恢复了功能活动,western blot、碱性磷酸酶染色及体外矿化均为阳性.体外实验证实:在转染含hBMP-2基因的重组腺病毒表达载体后,人胚肺成纤维细胞向成骨细胞表型转变,具有了骨形成的能力.本实验的成功完成为后续hBMP-2基因治疗的应用研究奠定了坚实的基础.
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