一株降解纤维素的链霉菌的分离纯化及其纤维素降解特性研究

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纤维素是自然界里广泛分布且含量丰富的一种有机化合物,利用微生物降解法可以达到低成本、高效率、无污染、高收益的目的。但目前能够高效降解纤维素的菌株还很少,所以筛选出一株纤维素酶活较好的菌株,对于解决环境问题、能源危机等具有重大意义。本实验从土壤中筛选出一株生长良好、能较有效地降解纤维素的放线菌。根据菌株的形态特征和生理生化特征,初步鉴定为放线菌中的链霉菌,并对该菌株的最适液体产酶条件、最适固体产酶条件、降解滤纸纤维素的特性、粗酶的制取与性质进行了研究。实验结果如下:1.利用双层平板法及划线法筛选到一株对纤维素有较好降解力的菌株,通过对其形态和生理生化特征进行观察、实验,依据《放线菌鉴定手册》和相关文献,确定该菌株为放线菌目,链霉菌科,链霉菌属,命名该菌为链霉菌SX-3(Streptomyces sp. SX-3)菌株。2.对该菌的液体发酵产酶条件进行研究,发现该菌的最适碳源是玉米皮;最适氮源为酵母膏;最适起始pH为7左右;最佳培养温度为28℃-30℃;最适培养基含量为40ml;最适接种量为3%;最适菌龄为3d。3.对链霉菌SX-3菌株进行了固体发酵产酶条件的研究,实验结果表明:玉米皮颗粒大小对固体发酵产酶影响不大;蛋白胨为最适氮源;蒸馏水为固体发酵产酶的最适培养液;该菌固体产酶发酵的最适浸提液是生理盐水;最适接种量为3ml;固体发酵产酶的最适温度为28℃;最适培养时间为第4d;最适含水量为20ml。4.分别将链霉菌SX-3在滤纸、玉米皮、葡萄糖液体培养基中进行发酵时,发现在前两者中培养时,其pH值有上升现象,而在后者中培养时,其pH值有下降趋势。测定该菌在滤纸和玉米皮液体培养基中培养时的产还原糖量,发现在前者中培养时,还原糖量有上升趋势;而在后者中培养时,还原糖量有下降趋势。上清液与底物比例为1:3时,CMC酶活较高;比例为1:1时,滤纸酶活较高。用酶液降解未处理的滤纸比处理过的滤纸产生更多的还原糖。5.将菌株SX-3液体摇瓶培养产生的粗酶液进行抽滤、超滤、硫酸铵盐析处理后,再经透析脱盐、低温冷冻干燥,得到粗酶干粉。对该粗酶的性质进行研究,实验结果表明:最适反应pH在5.8左右,其最适缓冲液体系为乙酸-乙酸钠缓冲液;在pH=6.0时最为稳定;最适反应温度为45℃;在温度40℃~50℃较稳定。
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