【摘 要】
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目的: 探讨骨细胞Wnt信号通路对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用及其分子机制。 方法: 利用条件性基因敲出Cre/loxp技术制备特异性激活骨细胞Wnt/p-Catenin信号
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目的: 探讨骨细胞Wnt信号通路对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用及其分子机制。 方法: 利用条件性基因敲出Cre/loxp技术制备特异性激活骨细胞Wnt/p-Catenin信号通路的小鼠;体外分离其与(同窝对照)小鼠的骨细胞,并分别与野生型小鼠骨髓间充质干细胞共培养;碱性磷酸酶(ALP)染色及活性定量、茜素红(Alizarin red)染色检测共培养早期成骨分化和晚期钙盐沉积;Real-Time PCR检测骨细胞Notch信号配体Jagl、Jag2、Dll1、Dll4及共培养后成骨分化特异标志物Runx2、ALP、Osteocalcin的mRNA表达水平。随后于共培养中加入Notch信号通路化学抑制剂DAPT(对照组加DMSO),再次行碱性磷酸酶(ALP)染色及活性定量和Real-Time PCR检测成骨分化特异标志物表达水平。 结果: Wnt/β-Catenin激活的骨细胞其自身Jag1、Jag2、Dll4mRNA表达较对照组骨细胞明显升高(P<0.05),与BMSCs共培养后成骨转录因子Runx2,成骨分化特异标志物ALP、Osteocalcin mRNA的表达较野生型明显升髙(P<0.05),钙盐沉积增加。加入DAPT后,骨细胞Wnt激活组成骨转录因子Runx2、ALP、Osteocalcin m RNA的表达明显下降(P<0.05)。 结论: 骨细胞调控骨的代谢,激活其Wnt/β-Catenin信号通路将通过上调Notch信号而促进BMSCs的成骨分化。
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