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肠道透壁性炎症、溃疡与纤维化缩窄足克罗恩病常见的肠道病理变化。克罗恩病的慢性炎症导致的组织溃疡和纤维化是一个平衡过程，取决于炎症细胞及肠道组织细胞的相互作用。最新文献提示肠黏膜下肌纤维母细胞(SEMF)参与了CD肠道炎症、溃疡、穿孔、溃疡部位结构重建及肠道纤维化缩窄形成。炎症状况下，SEMF过度表达化学趋化因子(IL—8，MCP-1等)与基质溶解酶(MMP-3)，在CD肠道炎症、溃疡及纤维化形成中具有重要作用。发现雷公藤除了具有调节器官细胞功能、抑制炎症及调节机体免疫作用外，还是化学趋化因子与基质金属蛋白酶的潜在抑制物，并通过NF—κB通路发挥抑制炎症的作用。本研究旨在探索雷公藤对克罗恩病的治疗作用及机制：观察雷公藤多甙对活动期克罗恩病的诱导缓解作用，重点研究雷公藤多甙对致炎因子、急性相反应蛋白的抑制、临床症状与内镜下表现的改善；体外探索雷公藤提取物对炎症状念下SEMF表达的化学趋化因子(MCP-1、IL—8)与基质溶解酶(MMP-3)的调节作用：最后通过对NF—κB信号通路的研究探求雷公藤提取物对炎症状态下SEMF的细胞内信号传导机制的影响。全文分为三部分：
第一部分雷公藤多甙对克罗恩病的临床疗效研究
目的：探讨雷公藤多甙对活动期CD的诱导缓解作用。
方法：患者入组条件：活动期克罗恩病(CDAI＞150)；年龄≥18岁；经影像学、组织学和临床标准明确诊断。排除条件：严重肝肾功能不全；重症感染、高位肠瘘及1个月内不正规服用任何CD治疗药物者；给药方法：雷公藤多甙片1mg/kg/d，口服。分别于0、2、4、6、8、10、12周检测：疾病活动度指数(CDAI，总分0-600；＜150为缓解期，＞150为活动期，150-220轻度，220-450中度，＞450重度)；CRP(ITM)；TNF—α、IL-1β(ELISA)；0周、12周行肠镜检查，行肠镜评分(CDEIS)。服药后每4周查血常规、肝肾功能。
结果：服用雷公藤多甙片12周CDAI显著下降(P＜0.001)。获得临床缓解(CDAI＜150)的患者第8周时5例(31.3％)，第12周时8例(50％)。12周时内镜评分CDEIS显著下降(P＜0.01)。12周时内镜下改善11例(69％)，无明显改变5例(31％)。CRP、IL-1β、TNF—α均显著下降：服药2周后CRP出现显著下降(P＜0.05)；服药4周后IL-1β、TNF—α出现显著下降(P＜0.05)。
结论：雷公藤对活动期克罗恩病具有诱导临床缓解、抑制炎症、改善肠镜下表现的作用。
第二部分Triptolide对IL-1β诱导的SEMF中IL—8，MCP-1与MMP-3表达量的调节作用
目的：观察Triptolide对IL-1β诱导的原代培养的人SEMF中化学趋化因子IL—8，MCP-1与基质溶解酶MMP-3蛋白及mRNA表达水平的影响。
方法：使用原代培养的SEMF作用研究对象。SEMF先与Triptolide(0.1，1，10，30，60 ng/ml)或相同含量的DMSO(对照)培养6h，再用IL-1β(10ng/ml)刺激18小时。细胞培养液中IL—8、MCP-1与MMP-3的分泌量使用ELISA进行检测，基因表达量使用实时定量PCR进行检测。
结果：成功建立SEMF的原代培养方法。在静息SEMF中，IL—8、MCP-1与MMP-3蛋白及mRNA的基础表达水平较低；Triptolide可影响静息细胞中化学趋化因子的表达，但不影响静息细胞中MMP-3的表达。IL-1β可显著诱导SEMF中IL—8、MCP-1与MMP-3蛋白及mRNA的表达水平；Triptolide可显著抑制IL-1β的诱导作用，并呈浓度依赖性。。
结论：在IL-1β激活的SEMF中，Triptolide对化学趋化因子(IL—8、MCP-1)与基质溶解酶(MMP-3)有下调作用，这可能是Triptolide抑制CD炎症、促进肠道溃疡愈合的机理。
第三部分Triptolide对IL-1β诱导的SEMF中IL—8，MCP-1与MMP-3mRNA表达的调节作用的分子机制
目的：探求triptolide对炎症状态下SEMF中IL—8，MCP-1与MMP-3mRNA表达的调节作用的分子机制
方法：先将SEMF与NF—κB抑制剂MG132(200 μmol/L)或PBS(对照)培养6h，再用IL-1β(10ng/ml)刺激18小时，收集细胞，使用实时定量PCR法检测化学趋化因子IL—8、MCP-1与基质溶解酶MMP-3的mRNA表达水平。为观察Triptolide对炎症状态下SEMF中NF—κB的DNA结合活性的影响，先将SEMF与triptolide(60 ng/ml)或相同含量的DMSO(对照)培养6h，再用IL-1β(10ng/ml)刺激4小时，收集细胞，提取核蛋白，使用凝胶电泳迁移法(EMSA)检测NF—κB的DNA结合活性。
结果：在SEMF中，NF—κB抑制剂MG132能抑制IL-1β诱导的IL—8、MCP-1与MMP-3mRNA表达。EMSA显示：静息细胞内NF—κB的DNA结合活性较低，Triptolide对其亦无调节作用：IL-1β显著诱导SEMF细胞核中NF—κB的DNA结合活性；Triptolide可削弱IL-1β约50％的诱导作用。
结论：在SEMF中，Triptolide通过NF—κB信号途径发挥对IL-1β诱导的SEMF中IL—8，MCP-1与MMP-3mRNA表达量的调节作用。
全文结论：雷公藤多甙对活动期克罗恩病具有诱导临床缓解、抑制炎症、改善内镜下病变表现的作用。致炎因子能刺激SEMF内化学趋化因子(IL—8，MCP-1)与基质溶解酶MMP-3蛋白和mRNA表达增多；在SEMF中，雷公藤内酯醇抑制了致炎因子诱导的化学趋化因子(IL—8，MCP-1)与MMP-3的表达；雷公藤内酯醇通过抑制SEMF内NF—κB通路发挥细胞调控作用。这可能是雷公藤抑制CD炎症和促进肠道溃疡愈合的机理。