内吗啡肽抑制氧化性损伤及诱导人白血病细胞凋亡作用

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活性氧(ROS)产生过多或体内的抗氧化防御系统障碍不能对抗过量的ROS,机体就处于氧化应激状态.氧化应激是许多慢性疾病如癌症、神经退行性紊乱发生的重要原因.脑比其他器官更容易受到氧化性损伤.因此,脑防御系统中抗氧化剂的存在是至关重要的.该论文研究了主要分布在脑中的内源性阿片肽--内吗啡肽1(EM1)和内吗啡肽2(EM2)对活性氧诱导的脂质过氧化、DNA损伤和蛋白质断裂的抑制作用,并且研究了它们对活性氧诱导的人低密度脂蛋白(LDL)脂质和蛋白氧化的保护作用以及诱导人早幼粒白血病(HL-60)细胞凋亡作用.结果发现:1.采用亚油酸在SDS胶束中氢过氧化物的形成测定脂质过氧化,质粒DNA断链技术及单细胞电泳技术测定DNA损伤,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术测定蛋白的损伤,研究了内吗啡肽对水溶性偶氮引发剂2,2-偶氮-二(2-脒基丙烷)盐酸盐(AAPH)、羟自由基(OH·)以及过氧化氢(H<,2>O<,2>)诱导的氧化性损伤的抑制作用.结果发现内吗啡肽可以显著抑制自由基诱导的脂质、DNA和蛋白质损伤,还可以与galvinoxyl自由基反应,另外用波谱扫描的方法发现内吗啡肽与AAPH作用后的氧化产物可能是阿片黑素.EM1的作用强于EM2及细胞内的水溶性抗氧化剂谷胱苷肽(GSH).2.采用铜离子(Cu<2+>)及AAPH诱导LDL氧化,通过检测共轭双烯、脂质过氧化反应产物(TBARS)及相对电泳速率(REM)研究了LDL脂质的氧化,检测LDL中辅基蛋白B(apoB)的断裂及其羰基形成研究了LDL蛋白的氧化.结果发现内吗啡肽能够浓度依赖地显著抑制Cu<2+>和AAPH诱导的LDL过氧化.在所有研究体系中,EM1比EM2和GSH的保护作用更强.另外,内吗啡肽对Cu<2+>诱导的LDL过氧化的保护作用明显强于对AAPH诱导的LDL过氧化的保护作用.3.采用MTT比色法测定细胞的增殖抑制,荧光显微镜和透射电镜观察细胞形态变化,琼脂糖凝胶电泳测定DNA"ladder",流式细胞仪测定凋亡细胞百分率,并且研究了细胞凋亡过程中的一些分子机制,用"Western blotting"测定了Bcl-2、Bax、Fas和FasL的蛋白表达变化.结果发现内吗啡肽能够抑制HL-60细胞增殖,并且诱导细胞凋亡,在它们的诱导凋亡过程中,Bcl-2的蛋白表达降低,Bax、Fas和FasL的表达均升高.这些结果表明,内吗啡肽通过激活Bcl-2/Bax和Fas/FasL的信号通路诱导HL-60细胞凋亡.
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