【摘 要】
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背景:宫颈癌是妇科恶性肿瘤导致死亡的常见原因,虽然通过手术、化疗、放疗及靶向治疗等手段提高了临床疗效,但宫颈癌患者的预后仍不满意,严重危害到女性的生命健康,因此,找到
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背景:宫颈癌是妇科恶性肿瘤导致死亡的常见原因,虽然通过手术、化疗、放疗及靶向治疗等手段提高了临床疗效,但宫颈癌患者的预后仍不满意,严重危害到女性的生命健康,因此,找到新的有效治疗靶点是目前的关键。N6甲基腺嘌呤(m~6A)是真核生物中最常见的RNA转录后修饰,也是RNA表观遗传学研究的重要内容之一,其主要相关蛋白(甲基转移酶、去甲基转移酶和甲基识别蛋白)的失调可导致癌症的发生发展。目的:观察YTH结构域N~6甲基腺嘌呤(m~6A)RNA结合蛋白2(YTHDF2)在宫颈癌组织和正常宫颈组织中的表达差异,确定其表达与宫颈癌患者的不良预后的关系,探讨YTHDF2对人宫颈癌细胞增殖和细胞凋亡的影响,为其在宫颈癌发生发展中的作用提供体外实验佐证,建立宫颈癌与m~6A甲基化修饰的关系。方法:利用人蛋白图谱(Human Protein Atlas,HPA)数据库分析YTHDF2在宫颈癌中表达及其与生存时间的关系;收集人宫颈癌和正常宫颈组织各31例,采用免疫组织化学法检测YTHDF2的蛋白表达差异;设计并构建能够特异性敲低YTHDF2的短发卡RNA(shRNA)的慢病毒重组载体;利用HEK-293T细胞包装慢病毒,并感染至宫颈癌HeLa细胞和SiHa细胞,实时荧光定量PCR法检测相应的mRNA表达水平,Western blot法检测YTHDF2的蛋白水平,采用CCK-8实验及克隆形成实验检测YTHDF2敲低对宫颈癌细胞增殖的影响,并采用流式细胞术检测YTHDF2敲低对宫颈癌细胞凋亡的影响。结果:HPA数据库分析发现YTHDF2在宫颈癌中表达越高其生存时间越短。免疫组织化学法显示YTHDF2在宫颈癌组织中的表达高于正常宫颈组织。成功构建了YTHDF2的靶向敲低重组质粒,包装慢病毒并将其感染至HeLa和SiHa宫颈癌细胞系中。与对照组相比,敲低宫颈癌细胞HeLa和SiHa中YTHDF2的表达水平后,细胞增殖能力明显受到抑制,细胞凋亡率明显升高。结论:敲低宫颈癌细胞HeLa和SiHa中YTHDF2的表达水平后,能够抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。
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