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胚胎停育是妊娠期常见的并发症之一,近年来随着辅助生殖技术(ART)在临床上的广泛应用,越来越多的不孕不育患者通过ART技术得到了健康的小孩,但同时也出现了一定比例(显著高于正常妊娠妇女)的胚胎停育现象,故越来越多的研究开始聚焦于胚胎停育的致病机理。本研究以母胎界面起主要调控作用的免疫耐受蛋白HLA-G分子为切入点,从组织、细胞和分子水平,系统研究了HLA-G分子在胚胎停育发生过程中的重要作用,以期为阐明胚胎停育的发病机制提供实验依据,并为该病的临床治疗提供新的思路。目的1.在mRNA水平与蛋白水平,系统研究HLA-G分子异常表达与胚胎停育的相关性;2.进一步深入研究HLA-G分子异构体mRNA与蛋白在胚胎停育绒毛中特异性表达;方法1.针对50例人工流产妇女的绒毛组织和50例胚胎停育患者的绒毛组织,采用半定量RT-PCR的方法,检测HLA-G在mRNA水平的表达变化,进一步通过S-P免疫组织化学染色法,检测HLA-G在蛋白水平的表达差异。2.针对上述人工流产和胚胎停育患者的绒毛组织,采用巢式RT-PCR的方法,检测HLA-G6个异构体在mRNA水平的表达变化,进一步通过Western-blot法,检测其异构体在蛋白水平的表达差异。结果1.在人工流产绒毛组织中,HLA-G mRNA100%阳性表达(50/50);胚胎停育患者绒毛组织中,39例HLA-G阳性,占总数78%(39/50),11例HLA-G阴性,占总数22%(11/50),差异具有统计学意义(P<0.05)。在胚胎停育绒毛组织中,HLA-G蛋白的表达显著低于其在人工流产绒毛组织中的表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.在人工流产绒毛组织中,100%表达HLA-G1,G2,G3,G4,G5,G6(50/50);在胚胎停育患者绒毛组织中,100%表达HLA-G1,G2,G3,G4,G6(50/50),差异均不具有统计学意义(P>0.05);35例HLA-G5阳性,占总数70%(35/50),15例HLA-G5阴性,占总数30%(15/50),经统计学分析, HLA-G5mRNA水平差异具有统计学意义(P<0.05)。同时,采用识别HLA-G1,HLA-G5异构体的抗体对这两种异构体进行蛋白水平的检测,结果显示:与人工流产绒毛组织相比,胚胎停育绒毛组织中HLA-G1,HLA-G5蛋白的表达显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论1. HLA-G蛋白水平的调控与胚胎停育密切相关,并推测HLA-G异常表达可能存在转录后调控机制。2.可溶性HLA-G(HLA-G5)分子异常表达与胚胎停育的发生特异性负相关。