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第一部分细胞自噬在原发性胆汁性肝硬化IgM产生中的作用 目的: 高血清IgM是原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis，PBC)一个显著的特征，其仅仅是本病的一个临床表现还是具有致病作用目前尚不明确，其产生的确切机制目前亦不完全清楚。细胞自噬在自身免疫性疾病的作用也越来越受到广泛的关注，已有研究表明其在免疫球蛋白及抗体的产生中亦起着重要的作用。细胞自噬是否参与PBC患者IgM的产生目前尚无相关研究。本研究意在探讨细胞自噬在PBC患者IgM产生中的作用。 方法: 收集22例在北京协和医院风湿免疫科门诊确诊的PBC患者，同期选取健康对照及疾病对照（活动性肝炎患者）（年龄和性别匹配），采集外周静脉血，分离外周血单个核细胞(PBMC)，磁珠分选纯化CD19+B细胞。 免疫荧光检测B细胞LC3-Ⅱ的聚集程度，流式细胞术检测B细胞p62/SQSTM1的表达水平，ELISA法检测细胞培养上清中IgM的水平。比较基础状态、PWM5μg/ml刺激24小时及3-MA10 mmol/L培养24小时后细胞自噬相关指标的变化情况，并分析其与IgM合成量的相关性。 结果: 1、基础状态下，免疫荧光检测显示PBC患者、HC及DC外周血B细胞的LC3-Ⅱ聚集程度信号很弱，各组间无明显差别;流式细胞术检测显示，PBC患者、HC及DC外周血B细胞p62/SQSTM1无表达。 2、PWM5μg/ml培养刺激24小时后，免疫荧光检测显示PBC患者、HC及DC外周血B细胞LC3-Ⅱ聚集程度较基础状态下均明显升高，且PBC患者组较HC及DC组要高;流式细胞术检测显示，PBC患者、HC及DC外周血B细胞p62/SQSTM1都有明显表达，PBC患者组外周血B细胞p62/SQSTM1的表达水平显著低于HC组，而与DC组无显著性差异;HC组及DC组外周血B细胞p62/SQSTM1的表达水平无显著性差异。 3、PWM5μg/ml刺激活化，免疫荧光检测PBC患者来源的B细胞LC3-Ⅱ的聚集程度在加入3-MA10 mmol/L处理与未处理无明显差异，而HC及DC来源的B细胞LC3-Ⅱ的聚集程度在加入3-MA10 mmol/L处理后较未处理低;流式细胞术检测显示，PBC患者及DC来源的外周血B细胞3-MA处理组较未处理组p62/SQSTM1的表达水平无显著性差异，而HC来源的外周血B细胞3-MA处理组较未处理组p62/SQSTM1的表达水平显著升高;3-MA处理组较未处理组，PBC患者来源的B细胞p62/SQSTM1平均荧光强度的差值较HC及DC来源的B细胞小，且差异有统计学意义，HC与DC来源的B细胞间无显著性差异; 4、PWM5μg/ml刺激活化后，PBC患者组和DC组细胞培养液上清中IgM的浓度在第7天达到峰值，HC组在第9天达到峰值，PBC患者细胞培养上清中IgM峰值较HC组显著升高，与DC间无显著性差异，HC组与DC间细胞培养上清中IgM峰值无显著性差异;3-MA处理组较未处理组，PBC患者及DC者细胞培养液上清中IgM的峰值浓度无显著性变化，HC者显著下降。 结论: PBC患者外周血B细胞基础状态下无自噬活动，活化后其自噬水平明显升高，且对自噬抑制剂3-MA的反应性减弱，与健康对照者组间存在显著性差异。自噬抑制剂抑制自噬功能后，正常对照者来源的外周血B细胞合成和分泌IgM的功能下降，而PBC患者来源的外周血B细胞对自噬抑制剂3-MA的反应性减弱，其自噬功能不能被抑制，IgM的生成水平也无明显变化。