羽藻细胞壁蛋白的研究

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对藓羽藻进行显微镜观察,藓羽藻生长素集中分布在叶尖,叶尖生长迅速使得大量原生质体高度集中。藓羽藻由于原生质体分布均匀,在距离不远的部位分布着细胞核。羽藻为单细胞多核管状绿藻,藻体主干和分枝均为一个细胞的组成部分,然而藻体和分枝并不是完全相通的。藻体主干与分枝之间没有细胞壁分隔,被认为是单一细胞。   性成熟的藓羽藻产生大量孢子体,孢子体放散单孢子,单孢子具有轮生鞭毛能游动经过穿过藻体细胞壁游到海水中。单孢子放散完毕后藓羽藻藻体只剩下细胞壁的空壳。单孢子于第二年夏天发育成叶状体,完成世代交替。   藓羽藻在原生质体被挤到海水能在3分钟之内迅速团聚成球状个体。在凝集素作用下分散的团聚体开始团聚成团。团聚成团后逐渐形成球状个体,球状体继续把周围细小的原生质体吸引过来成为更大的团聚体。整个团聚过程没任何外加物质,原生质体团聚能产生新的生命。   对不同团聚时间的团聚体进行蛋白质抽提和检测,发现一个蛋白在团聚过程中不断增加,推断其为细胞膜或者细胞壁蛋白。   分离了藓羽藻细胞壁,在CaCl2软化细胞壁后,用3M LiCl抽提细胞壁蛋白。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测发现细胞壁中一共含10种主要可溶性蛋白。Westernblot检测结果显示细胞壁蛋白未受细胞质蛋白污染。利用凝胶过滤层析和离子交换层析分离纯化出两个单一细胞壁蛋白,分子量为33.5KD的CWPR1和分子量为68.0KD的CWPR2。对CWPR1进行N-端测序发现CWPR1是N-端封闭蛋白;对CWPR2进行二级质谱分析,通过NCBI和Swissprot数据库检索发现CWPR2是一个新的蛋白。
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