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阿维菌素类抗生素(AVMs)的化学结构新颖,作用机制独特,杀虫活性强和杀虫谱广,对线虫和体外节肢动物有较强的驱杀作用。AVMs为农作物保护、动物和人类健康做出了重大贡献,是目前应用最广泛的抗寄生虫药物之一。AVMs包括阿维菌素(Avermectin,AVM)、伊维菌素(Ivermectin,IVM)、多拉菌素(Doramectin,DOR)等药物。虽然AVMs的作用剂量较小,但是作为脂溶性药物,AVMs在动物体内的残效时间较长,因此WHO将其列为高毒化合物。动物组织中AVMs残留一直是兽药残留研究领域重点监控对象之一。国内外已经建立了多种检测伊维素残留的理化检测方法,虽然有些方法比较灵敏、精确,但由于方法复杂、耗时长、花费大、技术要求高等原因而不适合大批量样品的筛选。作为一种灵敏、快速、特异性强的方法,酶联免疫吸附测定法正逐渐应用于药物的残留检测。为探索一种能够快速有效的检测伊维菌素残留的方法,本研究采用单克隆抗体技术和酶联免疫吸附测定等技术,合成人工抗原,制备出抗伊维菌素单克隆抗体,建立了检测IVM残留的ELISA测定法。通过碳二亚胺法合成半抗原、用NHS法和混合酸酐法将半抗原偶联到载体蛋白上,制备了人工抗原IVM-BSA和IVM-OVA。紫外扫描初步判定偶联成功,两种完全抗原IVM-BSA、IVM-OVA的结合比分别为16:1和21:1。EDC法合成了IVM的2种人工抗原,用其中的IVM-BSA作为免疫抗原,通过杂交瘤技术获得1株能稳定分泌抗IVM特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株6A9。制备的腹水效价为1: 32000,蛋白浓度为19.9mg/mL。与泰乐菌素、红霉素、乙酰红霉素的交叉反应率均在0.5%以下,与伊维菌素相似物阿维菌素的交叉反应率在15%。利用6A9杂交瘤细胞株的小鼠腹水单抗建立了检测IVM残留的间接竞争ELISA方法。采用包被抗原稀释度1:4000,腹水抗体的工作浓度1:8000,药物浓度在5～2000ng/mL范围内得到标准曲线线性方程为y =0.0725x - 0.795(R2=0.9874),IC50为141.25ng/mL,LOD低于5ng/mL,定量限达9.25ng/mL。初步应用于猪肝脏组织和肌肉组织的添加回收试验,样品经前处理后用于测定。当猪肝、肌肉样品处理液作4倍以上稀释时,样品基质干扰基本消失,且在5～5000ng/mL范围内,建立ELISA标准曲线的线性方程为:Y=0.2019x-2.1081,IC50为141.25ng/g。用200,1000,5000ng/mL的伊维菌素标准液做添加回收试验,经检测肌肉、肝脏药物回收率在66.8%～97.4%之间,批内差异在3.82%～6.74%之间,批间差异在4.33%～9.42%之间。