【摘 要】
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本研究以杂交早稻品种两优287为初始材料，先用蒸馏水培养至三叶期。用不同浓度的硝酸钾溶液(0.02mol·L-1、0.05mol·L-1、0.1mol·L-1)处理该水稻幼苗，以蒸馏水处理的材料为对
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本研究以杂交早稻品种两优287为初始材料，先用蒸馏水培养至三叶期。用不同浓度的硝酸钾溶液(0.02mol·L-1、0.05mol·L-1、0.1mol·L-1)处理该水稻幼苗，以蒸馏水处理的材料为对照，每隔24小时对叶片、叶鞘和根取样，连续取材三天后测不同时间点的硝酸还原酶活性(NRA)和蛋白质含量。结果表明，不同浓度的硝酸盐溶液均能明显诱导水稻幼苗中硝酸还原酶的活性，其中叶片中酶活性最强，叶鞘次之，根中基本没有活性；并且可以发现0.05mol·L-1浓度的硝酸钾溶液对硝酸还原酶活性的诱导作用最强。硝酸盐的处理对总的蛋白质含量没有太大影响，但与蛋白质的净增加量有一定关系。
在此基础上，用0.05mol·L-1浓度的硝酸钾溶液处理的材料，以蒸馏水处理的为对照，在三个不同的光照强度下(880lux、1560lux、10240lux)和不同光/暗条件下培养。每隔24小时对叶片和叶鞘取样，连续取材三天后测不同时间点的硝酸还原酶活性。
应用抑制性消减杂交技术，构建水稻中受硝酸盐特异诱导表达的cDNA消减文库。分别从处理材料Tester(1560lux光强下，0.05mol·L-1KNO3诱导)及对照材料Driver(蒸馏水培养)中提取总RNA，依次合成单链及双链cDNA，经酶切成平均大小为400-600bp的片段，将处理材料TestercDNA分为两组，分别与两种不同的接头连接，再与对照材料DrivercDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR后，将产物与T/A载体连接构建成功cDNA消减文库，并转染大肠杆菌进行文库扩增。构建成功具有较高消减效率的受硝酸盐特异诱导的cDNA消减文库，非特异性cDNA片段被有效地消减，特异表达的cDNA得到富集。随机挑取100个白色阳性克隆制备质粒，用菌落PCR法分析均得到400-1000bp插入片段。
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