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大蓟(Cirsium japonicum DC.)属菊科管状花亚科菜蓟族蓟属植物,其药效部位是地上部分或根。大蓟具有消淤血、生新血、止吐血、止鼻血和消疮毒等功效;可用于治疗肺结核、高血压、尿路结石尿血、痈疖等多种疾病,本文主要研究大蓟黄酮的提取纯化工艺,抗氧化作用和肝保护作用及机制。全文分如下三部分。第一部分:大蓟总黄酮的分离纯化与总黄酮成分的定性分析研究。包括:1.采用超声提取法从大蓟中获得大蓟总黄酮,以提取率为考察依据,通过正交实验得出最佳提取工艺条件为:乙醇浓度60%、料液比为1:15、超声时间为40 min、提取二次,大蓟黄酮的提取率为5.98%。2.用两种国产大孔树脂对大蓟黄酮进行静态吸附与解析实验。结果表明,AB-8型树脂最适于纯化大蓟黄酮。通过动态吸附解析实验确定了AB-8型大孔树脂纯化大蓟黄酮的最佳工艺条件:浓度5 mg/mL样品溶液,上样体积为10 mL,上样速率为2mL/min,用60%乙醇洗脱,洗脱体积为4BV,黄酮含量为79.65%,是纯化前的1.99倍。3.采用HPLC法对大蓟总黄酮的成分进行定性分析。结果表明,大蓟总黄酮中含有大蓟苷,蒙花苷。第二部分:大蓟黄酮的抗氧化活性研究。包括:1.采用7种检测指标:还原能力,清除DPPH·、·OH、O2-自由基和H2O2,抗脂质氧化能力和抗油脂氧化能力对大蓟黄酮进行抗氧化活性研究,抗坏血酸(Vc)和柠檬酸作为对照。结果表明大蓟黄酮具有较强的还原力,且还原能力Vc>大蓟黄酮>柠檬酸;对羟基自由基有较强的清除能力,且在20-100 μg/mL之间,清除率达到80%,对羟基自由基的清除能力大小依次为Vc>大蓟黄酮>柠檬酸;在13-65 μg/mL之间,大蓟黄酮对超氧阴离子具有一定的清除作用,但作用不及Vc和柠檬酸;对DPPH·有很强的清除作用,在浓度为0.05-1 mg/mL的范围内,大蓟总黄酮对DPPH的清除率最高,高于Vc和柠檬酸,在大蓟总黄酮浓度为1 mg/mL,清除率可到达96.38%;对过氧化氢具有一定的清除能力但作用不及Vc和柠檬酸;抗脂质氧化作用脂质抗氧强于Vc和柠檬酸,且其抗脂质作用的ICso为0.33 mg/mL;油脂的抗氧化效果明显,且作用呈一定的量效关系,抗氧化能力介于Vc和柠檬酸之间。2.对小鼠组织、细胞器和细胞进行体外抗氧化研究,采用分光光度法以探讨大蓟黄酮对小鼠红细胞氧化溶血、肝匀浆脂质过氧化和肝线粒体肿胀度为检测指标。结果表明,大蓟黄酮能够减少红细胞氧化溶血,降低由Fe2++H2O2诱导的肝组织匀浆MDA的产生,减轻Vc-Fe2+系统诱导的肝线粒体肿胀度,且作用呈一定的量效关系,实验结果表明大蓟黄酮具有对小鼠细胞器和细胞的体外抗氧化作用。第三部分:大蓟黄酮对四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠急性肝损伤模型的保肝作用及机制的研究。本实验通过分光光度法测定小鼠血清中ALT、AST、ALP的含量以及肝组织匀浆中SOD、GSH-Px、CAT和MDA的含量,HE染色观察小鼠肝组织的病理变化,探讨保肝作用及机制。结果表明,大蓟黄酮具有类似阳性对照药联苯双酯滴丸对肝脏的保护作用,可以调高机体抗氧化能力,减轻肝组织的损伤。大蓟黄酮给药组能显著的降低CCl4诱导的急性肝损伤小鼠血清中ALT、AST、ALP的含量, 显著降低组织匀浆中MDA的含量,并提高SOD、GSH-Px、CAT的含量。病理切片显示模型组:肝脏体积增大,质脆,边缘钝而厚,表明呈黄褐色;镜下见肝小叶结构破坏,肝细胞核消失,出现肝细胞变性、坏死和大量炎症细胞浸润,大蓟黄酮作用后,症状有明显改善。