【摘 要】
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为了构建黄瓜叶病毒(CMV)表达载体分离了山东株(SD) CMV RNA 3全长cDNA并测定了其全序列.采用定点突变的方法在衣壳蛋白(CP)基因的起始密码子处引入一个NsiI位点,把SD-RNA 3
【出 处】
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中国科学院生物研究所 中国科学院微生物研究所
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为了构建黄瓜叶病毒(CMV)表达载体分离了山东株(SD) CMV RNA 3全长cDNA并测定了其全序列.采用定点突变的方法在衣壳蛋白(CP)基因的起始密码子处引入一个NsiI位点,把SD-RNA 3的cDNA构建成一个置换盒.将绿色荧光蛋白(GFP)、β-葡糖醛酸酶(GUS)基因和小 鼠二氢叶酸还原酶(DHFR)基因三种报告基因分别插入Nsil位点和CP基因终止密码子上游的Xhol位点之间将CP基因换掉.把Fny株 CMV RNA1和RNA2以及嵌合SD-CMV RNA 3的cDNA分别插?pCass载体的CaMV 35S启动和终止之间,构建成侵染性cDNA克隆.用相应限制酶酶切释放含 35S启动和终止子序列的嵌合SD RNA 3、Fny RNA1和RNA 2的cDNA片段,混匀后以置换型载体的形式直接转染烟草悬浮细胞系BY2-CP原生质体,三种报告基因均获得了表达.
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