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目的：探讨去甲斑蝥素(norcantharidin，NCTD)对人真皮淋巴管内皮细胞(Human Dermal Lymphatic Endothelial Cells，HDLEC)的增殖、迁徙的抑制杀伤作用和对体外HDLEC三维培养形成的淋巴管生成的抑制作用及其相关分子机制，以寻找一种安全、有效、实用的“抗淋巴管生成”制剂。
方法：①通过HDLEC二维培养，应用MTT法计算NCTD对HDLEC的半数有效浓度(IC50)和细胞毒作用；应用Hoechst33258荧光染色、流式细胞仪、划线法和倒置显微镜、透射电镜检测、观察NCTD对HDLEC增殖、迁移的抑制、直接杀伤和诱导凋亡作用。②通过HDLEC三维培养，建立HDLEC体外模拟的淋巴管生成模型，应用倒置显微镜观察NCTD对淋巴管生成的抑制、破坏作用和对形态学的影响。③应用免疫细胞化学、Western-blot、实时荧光定量PCR技术测定NCTD对HDLEC三维培养体外模拟淋巴管生成过程中淋巴管生成因子VEGF-C、VEGF-D及其受体VEGFR-3蛋白/mRNA表达的影响，探讨NCTD的“抗淋巴管生成”相关分子机制。
结果：①MTT法测得不同浓度和时间的NCTD对HDLEC的增殖和生长有明显的抑制和杀伤作用(P＜0.01)，其半数有效浓度(IC50)为0.0068mg.ml-1:②应用Hoechst染色+流式细胞分析、倒置显微镜、透射电镜以及划线法，可观察到NCTD对HDLEC的形态和细胞的增殖具有显著的抑制和直接杀伤作用，并能促进、诱导HDLEC凋亡，其作用随NCTD浓度/时间的增加/延长而加强(P＜0.01)，同时可见NCTD对HDLEC的迁移亦有显著的抑制作用(P＜0.01)；③在HDLEC体外三维培养、成功建立HDLEC淋巴管生成模型的基础上，可观察到由NCTD引起的淋巴管生成形态学改变，即NCTD对体外正在形成和已形成的淋巴管生成有明显的抑制和破坏作用；④经免疫细胞化学、Western-blot检测，应用NCTD(NCTD组)和联合应用NCTD与VEGFR-3抗体(NCTD+VEGFR-3抗体组)可使HDLEC三维培养形成的淋巴管生成中的VEGF-C、VEGF-D蛋白表达明显降低(与空白对照组比较，P＜0.01;但VEGFR-3无差异，P＞0.05)，而单纯VEGFR-3抗体组VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3蛋白表达无差异(P＞0.05)；实时荧光定量PCR分析则显示，NCTD组、NCTD+VEGFR-3抗体组的VEGF-CmRNA、VEGF-D mRNA、VEGFR-3 mRNA表达均明显降低(P＜0.01)。
结论：①NCTD对人HDLEC的增殖、迁移具有显著的抑制、直接杀伤和诱导凋亡作用，并呈浓度/时间效应关系。②NCTD对体外HDLEC三维培养正在形成和已形成的淋巴管生成具有明显的抑制和破坏作用。③NCTD可在蛋白或基因水平使HDLEC三维培养形成淋巴管生成过程中的VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3表达下降。④NCTD的抗淋巴管生成效应，可能与NCTD直接抑制淋巴管内皮细胞的增殖与迁移，诱导凋亡，下调淋巴管生成因子VEGF-C、VEGF-D及其受体VEGFR-3的表达，阻抑VEGF-C、-D/VEGFR信号通道有关。