【摘 要】
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目的:验证二甲基亚砜(Dimethy Sulfoxide,简称DMSO)是否是目前最好的角膜冷冻保护剂;用乙醇可否替代DMSO用于角膜的深低温冷冻保存.方法:将16只新鲜兔角膜随机分为DMSO组和乙
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目的:验证二甲基亚砜(Dimethy Sulfoxide,简称DMSO)是否是目前最好的角膜冷冻保护剂;用乙醇可否替代DMSO用于角膜的深低温冷冻保存.方法:将16只新鲜兔角膜随机分为DMSO组和乙醇组.两组保护浓度分别为(1)25%白蛋白;(2)10%蔗糖;(3)7.5%DMSO和(1)25%白蛋白(2)10%蔗糖;(3)10%乙醇.将角膜于+4℃分别浸入浓度递增的上述两组保护液中,冷平衡时间各液均为10分钟.然后开始降温过程.将标本瓶置于自制的控速降温器(液氮罐)中,调整标本与液氮液面的高度,按1.5-2℃/分的速度降温至-30℃后,进一步降低标本瓶的高度,使降温速度以5℃/分降温至-80℃,然后直接将标本瓶投入液氮中.冷冻保存角膜5天后取出,置于+50℃流动的热水中复温,使标本瓶于1分钟内融化,然后将角膜片取出,浸入5ml 25%白蛋白溶液中脱保护剂10分钟,每组各6只角膜在盛有5ml林格氏液的小皿中漂洗三次,将角膜内皮朝上置于凹形角膜台上,滴入0.25%锥兰染色1.5分钟,再用林格氏液漂洗后,用0.2%茜素红(PH=5.5)染色3分钟,漂洗三次.将角膜内皮朝上置于载玻片上,于光学显微镜下进行观察计数,并计算每只角膜平均内皮细胞存活率.每组余下的2只角膜,用林格氏液漂洗后,置2.5%戊二醛溶液中,分别用于扫描电镜和透射电镜检查,观察内皮细胞超微结构.℃℃℃结果:DMSO组和乙醇组平均内皮细胞活率分别为96.18±2.49%,92.55±6.24%,两组培养有显著性差异(P<0.05).扫描电镜下,DMSO组角膜内皮细胞呈六角形,细胞完整似新鲜角膜,细胞间隙稍宽.乙醇组角膜内皮亦呈六角形,但细胞间隙明显增宽,局部区域可见胞膜破裂及细胞缺损.透射电镜结果显示两组角膜内皮细胞均有线粒体肿胀,内质网扩张及胞质内空泡形成,但乙醇组改变更明显.结论:该实验研究提示乙醇的冷冻保护作用不如DMSO.
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