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rLj-RGD3为来自七鳃鳗口腔唾液腺中含有三个RGD模体的RGD毒素蛋白，并且与组氨酸富含糖蛋白HRG具有序列同源性。RGD毒素蛋白及HRG都具有抑制血管新生的活性，但是由于作用靶点不同而涉及不同的信号通路。本文关注于rLj-RGD3及其KGD突变体蛋白抗血小板聚集和抗血管新生活性的比较研究。KGD模体具有与血小板细胞膜表面糖蛋白GPⅡb/Ⅲa专一性结合，而与血管内皮细胞表面高表达的整合素αvβ3不结合的特点，因此含有KGD模体的蛋白具有专一性抗血小板聚集而对血管新生无抑制作用的特性，从而有利于开发出专一性抗血栓新药。通过对野生型rLj-RGD3进行RGD模体替换为KGD模体的突变，获得了系列KGD模体突变蛋白，包括rLj-116、rLj-28和rLj-26。对上述突变体蛋白的纯化物进行了抗血管新生和抗血小板聚集活性的研究。采用人脐静脉内皮细胞ECV304为体外血管新生模型对其抗血管新生活性进行了比较研究:MTT细胞增殖实验结果显示rLj-RGD3和rLj-116抑制ECV304细胞增殖的IC50分别为0.562μmol/l和0.832μmol/l，rLj-26和rLj-28均没有明显抑制作用;细胞凋亡实验表明rLj-RGD3和rLj-116均具有剂量依赖性诱导细胞发生凋亡的作用，而rLj-26和rLj-28不能诱导ECV304发生凋亡;采用Transwell细胞培养板检测各蛋白对bFGF诱导ECV304细胞迁移的抑制作用，结果显示rLj-RGD3和rLj-116对ECV304细胞迁移的抑制作用显著，而rLj-28作用差异不明显， rLj-26无抑制作用。利用人工基质膜基质Matrigel及Transwell模仿体内环境，研究rLj-RGD3与三种突变体蛋白对ECV304细胞浸润的抑制作用，结果显示rLj-RGD3和rLj-116均明显抑制以bFGF为趋化剂的ECV304细胞穿透Matrigel的浸润行为，而rLj-28作用不明显，rLj-26无抑制作用;以鸡胚绒毛尿囊膜(chickenchorioallantoic membrane，CAM)作为体内血管新生模型，测定了各蛋白对体内血管新生的抑制作用，结果表明rLj-116和rLj-RGD3对CAM的血管新生具有明显的抑制作用，其余实验组均无显著效果;采用兔的富血小板血浆(platelet-richplasma，PRP)系统进行血小板聚集测试，结果显示rLj-RGD3和rLj-116的抗血小板聚集作用比较显著，呈剂量依赖关系，且rLj-116的抑制作用要远远强于rLj-RGD3，其他实验组则均无明显作用。由此得出如下推论:(1)含KGD模体的蛋白对血管新生无抑制作用，rLj-116蛋白是以类富含组氨酸糖蛋白HRG的结构行使的抗血管新功能;(2)rLj-RGD3蛋白不能通过自身的RGD模体结构与组氨酸富含结构域产生的抗血管新生作用产生正协同效应;(3)rLj-116能高效抑制血小板聚集，其功能的行使依赖于含有组氨酸序列为其提供的立体结构。