【摘 要】
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era基因是在测定大肠杆菌基因组序列时,在编码RNaseIII的rnc基因下游发现的一个开放读框.因其编码的氨基酸序列与人及酵母的Ras蛋白有部分相似之处,故命名为E.coliRas-like(e
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era基因是在测定大肠杆菌基因组序列时,在编码RNaseIII的rnc基因下游发现的一个开放读框.因其编码的氨基酸序列与人及酵母的Ras蛋白有部分相似之处,故命名为E.coliRas-like(era)基因.遗传学实验证明era基因与细胞周期和细胞分裂有关.在线虫、金鱼草、小鼠到人都有与细菌era基因同源的基因.其中人era-cDNA基因全长2.2kb,含长度为1038bp的开放读框,编码346个氨基酸的蛋白质.人Era蛋白是由N端的GTPase结构域和C端的KH结构域所构成.但有关人Era的功能至今还不清楚.为了能了解这个从细菌到人类高度保守的era基因在人体中的功能,该论文进行了以下基础性的工作.在SDS-聚丙稀酰胺凝胶上,将含有hEra-C端结构域蛋白的条带(Mr为21000)切割并研磨成凝胶悬液,作为免疫原免疫家兔,制备兔抗hEra多克隆抗体.经Westernblot检测,多克隆抗体的效价可达到1:800.含有重组表达质粒pMSM-hEra的工程菌株TB1,经0.3mmol/LIPTG诱导后,MBP-hEra的表达量随着时间的延长而增加,以4hr最高,占菌体总蛋白的23.9﹪.表达融合蛋白MBP-hEra菌株经超声波裂解,MBP-hEra大部分以可溶态存在于裂解上清液中.另外,通过Westernblot检测,发现hEra在胎儿肾、肝、肺、肌肉和胸腺中均有表达.采用免疫组化方法,对54例原发性肝癌组织hEra的表达进行检测.结果显示,hEra在原发性肝癌组织中的表达明显高于正常肝组织,临床资料证实hEra表达与肝癌的分化有关.从而认为hEra的检测可以作为肝癌的恶性程度判断及预后的参考指标.
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